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柱层析法

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柱层析法是一种用于分离化合物在溶液中的多功能净化方法。混合溶液被通过溶剂通过一个包含吸附剂的固体,称为固定相的列。复合溶剂和样品的混合物称为流动相。

在流动相中分子穿越列在不同的利率,基于它们的化学特性和它们对固定相的亲和力。因此,每种化合物退出列在不同的时间。一旦被分离和纯化化合物他们可以进一步加工或准备分布。这个视频将介绍基本的柱层析,然后演示的有机物净化技术。

在柱层析、 分子可逆吸附到固定相在它们流经列,从而拖慢了他们的进步。交互弱与固定相的化合物能更快地退出列,或洗脱。的互动强烈与固定相的化合物都是慢洗脱。固定相是吸附剂粉或凝胶硅胶或氧化铝等。硅胶和氧化铝是强极性的所以他们强烈的互动与极性化合物和溶剂,和弱与非极性分子。固定相是加载到列作为浆与溶剂,然后包装的流动通过固定相溶剂。当妥善包装,固定相是从顶部到底部均匀和包含没有气泡或干燥的修补程序,因为这些违规行为所造成的非均匀流动会干扰化合物的分离。溶剂或淋洗液,通常是从水库提供一种有机溶剂。一般情况下,非极性溶剂只洗脱非极性化合物,而极性溶剂洗脱极性和非极性化合物。如果一种混合物含有显著不同极性化合物,一系列日益极性溶剂可用于洗脱所有感兴趣的化合物。流动相流速通常受控制旋塞阀在列的底部。流中的停顿是减至最低,避免扩散的化合物。流动相离开柱,洗脱,收集在分数保持分离的化合物。既然你了解柱层析的原理,通过纯化有机成分的混合物的过程吧。

若要开始执行的步骤,获取设备如所述的文本。权衡每种化合物被孤立和记录质量的圆底烧瓶。接下来,秤量该样本和溶解在溶剂所需的最低数量。应使用薄层色谱法预先确定适当的溶剂。Rf值应为 0.2-0.3 之间。然后,确定硅胶固定阶段基于干重的样品和基于薄层预筛选的感兴趣的化合物迁移距离的差异所需的量。锥形瓶中倒入适量的硅凝胶。溶剂添加硅胶,直到浆是半透明和自由移动,当烧瓶打旋。接下来,选择足够大硅胶将填补它一半的列。如果列没有玻璃熔块,放入列玻璃棉和坚定地按它的长杆底部。盖约 2 厘米的沙子来防止硅玻璃羊毛穿过玻璃羊毛。在通风橱里夹紧环的立场,允许足够的空间下面以适应测试管柱。

一个漏斗放入列和确保旋塞阀关闭。在浆料倒入列,轻轻地敲打面浆落定排除气泡。冲洗漏斗、 长颈瓶和墙壁的溶剂中,将所有的凝胶转移到列的列。

列下锥形瓶的地方。打开旋塞阀,并使溶剂排进瓶子里,直到溶剂量只是高于硅胶,然后关闭旋塞阀。倒入约 2 厘米厚的沙子上凝胶。轻轻地冲洗下来任何列的两侧与溶剂粘砂。流失的溶剂根据需要所以沙子大多是干的但硅仍然是完全覆盖。

若要开始分离,样品向列添加没有令人不安的沙子。冲洗下来秉承列墙任何样品,并冲洗掉样品容器使用溶剂的小的部分。仔细排水溶剂,直到水平是上方的二氧化硅。然后,使用吸管,轻轻地将添加 4 — — 5 毫升的溶剂而不会干扰的砂层。放入列一个漏斗,慢慢地装满溶剂。烧瓶中删除并替换标记的试管。第一次测试管到位,打开旋塞阀和收集洗脱液,直到测试管几乎已满。

继续收集馏分,直到被洗脱了所有所需的化合物,通过标记试管按顺序进行。完成后,关闭旋塞阀。

为每个化合物,结合预加权的圆底烧瓶中纯的分数。从对旋转蒸发瓶除去溶剂,然后权衡包含干式复合的圆底烧瓶。更多的信息,请参阅关于旋转蒸发的此集合的视频。

此示例包含四苯基卟啉,或 TPP 和芴酮的混合物。黑暗的红紫色 TPP 洗脱第一,其次是黄芴酮。核磁共振波谱法证实了每个孤立的化合物的纯度。

柱层析法用于纯化和分析在不同的科学领域。

高性能液相色谱法或高效液相色谱法,是一种提供优秀分离化合物之间的柱层析和可以纳入专门的探测器,如放射性标记分子的辐射探测器。使用高效液相色谱法,放射性标记的磷脂可轻松分离混合物的许多其他人即使它弥补了小 %的混合物。此信息可以帮助阐明生产,调节和许多重要的生物分子的功能。

柱层析法是柱色谱流动相流经列在空气或气体的压力下,而不是由重力流独自一个变种。

这将创建流动速度快、 尽量减少扩散的更好的分离。如图所示,用薄层色谱法,导致优秀后纯化收率和纯度,在少数几种纯净而集中馏分,收集所需要的化合物。

通常柱仪并不适用于分离小卷,但一些混合物并不兼容等高效液相色谱法的专门技术。小型净化玻璃移液管柱被用移液管灯泡,适用于小型闪存色谱。准备一个样本为专门的净化技术或大规模纯化后的最后一步时,这是特别有用。

你刚看了柱层析的朱庇特的简介。你现在应该熟悉的柱层析法、 硅胶柱层析、 程序和技术的一些应用原则。

谢谢观赏 !

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