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Organic Chemistry

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カラム ・ クロマトグラフィ

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カラム ・ クロマトグラフィは汎用性の高い精製法のソリューションで化合物を分離するために使用です。ソリューションの混合物は、固定相と呼ばれる、吸着剤の固体を含んでいるコラムを通して溶媒によって運ばれます。結合された溶媒とサンプルの混合物は、移動相と呼ばれます。

移動相の分子はその化学的特性と固定相の親和性に基づく異なるレートで列を通過します。したがって、各化合物は、別の時間に列を終了します。化合物の分離し、精製されている一度、彼らはさらに処理することができます。 または配布の準備ができています。このビデオは、カラム ・ クロマトグラフィの基本を紹介します、有機化合物の精製の技術のデモンストレーションします。

カラム ・ クロマトグラフィで進度を遅くことにより、列を通過すると、分子が可逆的固定相に吸着します。弱固定相と相互作用する化合物は、列を終了または溶出する高速です。強く固定相と相互作用する化合物の溶出が遅くしています。固定相は、吸着剤の粉末またはシリカゲルやアルミナなどのゲルです。極性化合物と溶剤および弱非極性分子と強く相互作用するので、シリカゲルやアルミナは極性が高くです。静止した段階、溶剤、スラリーとして列に読み込まれる、流れることによって満載ですし、固定相を溶媒。適切に梱包、静止した段階は、上から下まで均一とこれらの不正行為による不均一な流れを作り出す化合物の分離をする空気泡無しまたは乾燥のパッチが含まれています。溶剤または溶離液は、通常、貯水池から供給される有機溶剤です。一般に、非極性溶媒では、極性溶媒溶出北極および無極性化合物に対し非極性化合物が溶出のみが。混合物には、大幅に異なる極性の化合物が含まれている場合、ますます極性有機溶剤のシリーズにすべての関心の化合物の溶出に使用可能性があります。移動相流量通常、列の下部にバルブによって制御されます。流れの一時停止は、化合物の拡散を避けるために最小限に保持されます。溶出液と呼ばれる、柱を残して移動相は、化合物の分離を維持するために分数に収集されます。カラムクロマトグラフィーの原理を理解することは、有機化合物の混合物の浄化のための手順を行ってみましょう。

手順を開始するには、テキストに記載されている機器を入手します。分離する質量を記録し各化合物の丸底フラスコの重量を量る。次に、サンプルの重量を量るし、最低限必要な溶媒量を溶かします。適切な溶媒は、薄層クロマトグラフィーを使用して前もって決定される必要があります。Rf値は 0.2-0.3 の間する必要があります。その後、サンプルと TLC の事前の審査に基づく興味の化合物の移動距離の差の乾燥重量に基づく固定相に必要なシリカゲルの量を決定します。シリカゲルの適切な量を三角フラスコに注ぐ。スラリーは半透明、フラスコが渦巻くとき自由に動くまで、シリカゲルに溶媒を追加します。次に、シリカゲルが中途半端に埋めること十分に大きい列を選択します。列にガラス釉薬が設定されていない場合、列にグラスウールを入れるし、しっかりと長い棒が付いている底に押し込みます。シリカが、グラスウールを通過するを防ぐために砂の約 2 cm のグラスウールをカバーします。発煙のフード リング スタンド、試験管に合わせて以下の十分なスペースを許可する列をクランプします。

列に漏斗を置き、活栓を閉じていることを確認します。空気の泡を除外するスラリー安定するように側面をやさしくタッピング列にスラリーを注ぐ。漏斗、フラスコ、および溶媒でカラムにゲルのすべてを転送する列の壁をすすいでください。

列の下の三角フラスコを配置します。活栓を開いてと溶媒のレベルは、シリカゲルのすぐ上までフラスコに流出し溶媒を許可し、活栓を閉じます。約 2 cm のゲルの上に砂を注ぐ。溶剤列の両側に付く砂を軽くすすいでください。完全に覆われてので、砂は乾燥し、ほとんどがシリカを必要に応じて溶剤を排出します。

分離するには、砂を乱すことがなく列にサンプルを追加します。溶媒の少量を使用して、列の壁に付着した試料を下洗いする、サンプル容器を洗います。レベルはシリカのすぐ上まで慎重に溶剤を排出します。ピペットと優しくは、砂の層を乱すことがなくの 4-5 mL の溶媒を追加します。列に漏斗を置き、ゆっくりと溶剤で埋めます。フラスコを削除し、ラベル付き試験管で置き換えます。場所の最初のテスト チューブ、活栓を開き、テスト チューブがほぼいっぱいになるまで溶出液を収集します。

すべての必要な化合物が溶出されて、ラベル付きの試験管を順番に進むまで分数の収集を続行します。終了したら、活栓を閉じます。

各化合物分離、あらかじめ重量を量られた丸底フラスコの純粋な分画を組み合わせてください。ロータリーエバポレーターでフラスコから、溶媒を除去し、乾燥の化合物を含有する丸底フラスコの重量を量る。詳細については、回転蒸発のこのコレクションのビデオを参照してください。

このサンプルには、フルオレノンや TPP、テトラフェニルポルフィリンの混合物が含まれています。暗い赤紫色 TPP は続いて黄フルオレノンまず、溶出しました。各単離した化合物の純度は、NMR 分光法により確認された.

カラムクロマトグラフィーは、精製と様々 な科学分野の解析で使用されます。

高速液体クロマトグラフィーや高速液体クロマトグラフィー、化合物間に優れた分離カラム ・ クロマトグラフィのフォームは、標識分子の放射の探知器など特殊な検出器を組み込むことができます。高速液体クロマトグラフィーを使用して、radiolabeled リン脂質簡単に分離できます他の多くの混合物から混合物のほんの数パーセントを占めていて。この情報は、生産、調節、および多くの重要な生体分子機能の解明を助けることができます。

フラッシュ クロマトグラフィーはカラム ・ クロマトグラフィ移動相が重力流だけではなく、空気やガスの圧力の下の列を移動するのです。

これはよりよい分離のための拡散を最小限に抑え、高速な流量を作成します。目的の化合物は、薄層クロマトグラフィー、優れた後精製収率、純度の結果に示すように、いくつかの純粋な集中された分数に収集されます。

通常塔装置は小さなボリュームを分離するために適切ではないが、いくつかの混合物は高速液体クロマトグラフィーなどの専門的な技術と互換性がありません。小規模浄水は、小規模フラッシュ クロマトグラフィー用ピペット電球ガラス ピペット列で実行されます。これは、特殊な浄化技術や大規模な浄化の後、最後の手順として、サンプルを準備する際に特に役立ちます。

カラム ・ クロマトグラフィのゼウスの概要を見てきただけ。カラム ・ クロマトグラフィ、シリカゲル カラムクロマトグラフィーのプロシージャおよび技術のいくつかのアプリケーションの原則に精通している必要がありますできます。

見てくれてありがとう!

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