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Analytical Chemistry

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Normes internes

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Perte d’échantillon peut se produire chaque fois qu’un échantillon est manipulé ou transféré, ce qui rend les calculs précis de concentration difficile.

Pour assurer l’exactitude, les effets de la perte de l’échantillon doivent être minimisés en utilisant la préparation minutieuse et en limitant le nombre d’étapes de manutention et de transfert échantillon. Cependant, perte de l’échantillon peut également se produire en raison d’erreurs systématiques, telles que les variations dans la procédure analytique, effets matriciels et manipulation de l’échantillon incomplet.

Ces sources de perte peuvent être expliquer en ajoutant une concentration connue d’une espèce similaire, mais non identique à celle du composé d’intérêt. C’est ce qu’on appelle un étalon interne. Les pertes d’échantillon qui se produisent à l’étalon interne devraient être similaires pour l’analyte, permettant la concentration être calculée avec précision.

Cette vidéo illustre l’utilisation d’une technique interne laboratoire standard et correct pour tenir compte de la perte de l’échantillon lors de la détermination de la concentration d’un inconnu.

Un étalon interne est une substance ajoutée dans une quantité connue de normes, échantillons, ainsi que les blancs au cours de l’analyse.

En spectroscopie et chromatographie, le rapport du signal de l’étalon interne et l’analyte est calculé. Ce ratio, appelé le facteur de réponse, est proportionnel au rapport de l’analyte et la concentration standard.

Facteur de réponse, R, peut être exprimée par l’équation suivante, où A représente les signaux analytiques de l’échantillon et l’étalon interne et la C représente la concentration de l’échantillon et l’étalon interne.

Un étalon interne peut compenser les erreurs systématiques et aléatoires. Par exemple, des erreurs aléatoires, tels que les incohérences lors de la mesure d’un échantillon de—seront les mêmes pour l’étalon interne et l’analyte. Par conséquent, le ratio de leurs signaux ne changera pas.

Pour les erreurs systématiques, telles que les effets de matrice en solution, le ratio ne seront pas affecté tant que l’effet de matrice est égale à la norme et de l’analyte.

Normes internes offrent un grand avantage, il peut être difficile de choisir celui qui convient. Un étalon interne doit avoir un signal qui est similaire, mais non identique à celle de l’analyte. Il ne peut pas concerner la mesure de l’analyte en quelque sorte.

Enfin, la concentration doit être connue. Ce résultat est obtenu en veillant à ce que l’étalon interne n’est pas nativement présente dans l’échantillon ; ainsi, la seule source de celui-ci dans la solution est la concentration sera ajoutée.

Dans l’expérience suivante, la concentration de caféine dans un échantillon inconnu déterminera par chromatographie en phase gazeuse.

Ceci est réalisé en créant une courbe d’étalonnage à l’aide de solutions de caféine connu, avec l’adénine comme étalon interne. La pente de la courbe d’étalonnage est égale au facteur de réponse.

Une fois que le facteur de réponse est connu, la concentration de l’inconnu peut être calculée de son rapport des surfaces mesurées chromatogramme.

Maintenant que vous comprenez les bases des normes internes, nous allons jeter un oeil à la procédure.

Pour commencer la procédure, peser 100 mg de l’adénine standard, interne, dans un bécher propre.

Ensuite, dissoudre dans à peu près 20 mL du diméthylsulfoxyde et mélanger la solution.

Une fois que l’adénine est dissout, verser la solution dans une fiole jaugée de 50 mL.

Rincer le becher et remuez bar avec 10 mL de DMSO et versez le rinçage dans la fiole. Répétez ce rinçage à deux reprises, afin d’assurer le transfert de la solution adéquate. Remplir jusqu’au repère d’étalonnage, ce qui entraîne un étalon interne avec une concentration de 2 mg/mL.

Ensuite, peser 100 mg de caféine dans un bécher de préparer une solution-mère. Dissoudre la caféine avec une petite quantité de méthanol. Ensuite, utilisez 3 rinçages pour transférer cette solution dans une fiole jaugée de frais 25 mL. Il s’agit de la solution mère de 4 mg/mL. Utilisez-le pour créer 3 normes de caféine.

Ensuite, ajouter 0,2 mL de l’adénine standard, interne, dans chaque fiole. Remplissez chacune au volume final avec du méthanol. Transférer chaque solution dans un flacon d’échantillonnage.

Chaque norme de caféine, traversent un chromatographe en phase gazeuse. Calculer le ratio de la surface des pics de la caféine par rapport à l’adénine standard.

Tout d’abord, environ 2 g de café dans un bécher de 100 mL et noter le poids.

Ensuite, ajoutez 20 mL de méthanol pour extraire la caféine du café. Laisser la solution de remuer pendant 20 min.

À l’aide d’un entonnoir Büchner, filtrer le Marc de café. Rincer le becher avec une petite quantité de méthanol et versez Ce rinçage dans l’entonnoir. Répéter deux fois le rinçage.

Mesurer le volume final du filtrat ; Il devrait être d’environ 35 mL.

Pour la préparation des échantillons pour analyse, ajouter 1 mL de l’extrait de café dans un flacon d’échantillonnage. Ensuite, ajouter 0,2 mL de l’étalon interne de l’adénine et placer le flacon dans rack échantillonneur automatique de l’instrument.

Exécuter une analyse de chromatographie en phase gazeuse de l’échantillon, en veillant à ce que les conditions sont telles que la caféine et l’adénine sont séparés.

À l’issue de l’analyse, calculer la surface du pic de l’étalon interne tant de l’analyte.

Une fois que tous les échantillons ont été analysés, la courbe de tarage standard peut être déterminée pour les solutions de caféine/adénine en traçant les ratios de la surface des pics versus les ratios des concentrations. La pente de cette ligne, qui représente le facteur de réponse, était de 1,8.

Ensuite, les données de GC de l’échantillon d’extrait de café sont analysées. Le ratio de la surface des pics a été évaluée à 1,78. En utilisant le facteur de réponse et la concentration de l’adénine standard, interne, la concentration de caféine dans l’échantillon inconnu a été évaluée à 0,33 mg/mL.

Beaucoup de différents types de réactions, à travers divers disciples scientifiques, utilise des normes internes afin de minimiser les effets des erreurs et de perte d’échantillon.

Les effets de la perte d’échantillon rencontrées au cours de la préparation de l’échantillon peuvent être minimisés en utilisant des étalons internes, gardant leur ratio de concentration presque constante.

Dans cet exemple, les lipides bioactifs ont été extraites des cellules lysées par un procédé d’extraction liquide-liquide. Isotope stable de normes internes ont été ajoutés au début de l’extraction pour tenir compte des erreurs au cours de la préparation de l’échantillon.

Normes internes ne sont pas seulement essentiels pour la préparation des lipides bioactifs, mais aussi pour l’analyse. Les lipides sont séparées de chromatographie en phase liquide à haute performance et analysé par spectrométrie de masse.

En spectroscopie, normes internes peuvent aider correct pour des erreurs aléatoires en raison de changements dans l’intensité de la source lumineuse. Si une lampe ou autre source lumineuse a une puissance variable, il affectera l’absorption et par conséquent, l’émission d’un échantillon. Toutefois, le ratio d’un étalon interne d’analyte reste constant, même si la source lumineuse n’est pas.

En chromatographie, une des plus importantes sources d’erreur est l’injection. Auto-échantillonneurs minimiser cela, mais erreur peut encore être écart-type relatif de 1 à 2 %.

Dans cet exemple, normes de vapeur contenant un étalon interne ont été analysés par chromatographie gazeuse pour établir une courbe d’étalonnage. Une fois cela terminé, l’échantillon inconnu pourrait alors être mesuré et les pertes en raison de la volatilité de l’échantillon ont représenté.

Vous avez juste regardé introduction de JoVE aux normes internes. Vous devez maintenant comprendre les pratiques exemplaires pour réduire perte d’échantillon, normes internes et les facteurs de réponse.

Merci de regarder !

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