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キャピラリー電気泳動 (CE)

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キャピラリー電気泳動または CE は、サイズと電荷によると電界の分子を分離させて化学分析に使用される手法です。

キャピラリー電気泳動、キャピラリー、流れる電解質溶液が含まれていると呼ばれるサブミリ径管で実行されます。キャピラリーにサンプルを注入し、電界が適用されます。分子料金、サイズ、および溶媒の粘度の影響は彼らの速度の違いに基づいて分離されます。CE は荷電分子の分離に最適な高速液体クロマトグラフィーよりも大きい解像度より効率的かつ敏感なそれを作るします。

このビデオはキャピラリー電気泳動の基礎を紹介し、清涼飲料の組成を決定することによりその使用をデモンストレーションします。

CE では、電界は、電解質で充填キャピラリーに適用されます。電界は、キャピラリーの入口では、正電荷と出口に負電荷を誘導します。

電界誘起キャピラリー中で電解質の流れ。電気浸透流と呼ばれる、この流れは負荷電の毛細血管壁に沿って塩イオンを荷電の離散層の動きが原因です。

毛細血管を通して電気の現在実行の壁に沿って陽イオンは負の端に向かって移動します。このイオンの流れは、管を通ってセンターのソリューションを取得します。

分子はそれから分かれているサンプルは、キャピラリー内の速度に基づいています。この速度は、電気泳動移動度と呼ばれる分子の電荷とサイズ、およびどのくらいそれを集めて、電界印加による反発によって決まります。

正荷電の分子は、出口に潜在的により集めています、毛細血管を介してより速く流れます。負荷電分子流はるかに遅くより可能性を入口に集めています。中性分子は、バルクの流れに沿って実行されます。したがって、毛細血管を終了する分子の順序は正荷電、中立的なそして、負荷電です。また、電解質流摩擦力により大きい分子より小さい分子を引っ張る。

列を終了し、レーザービームと呼ばれる検出器信号の強度対時間のプロットでは、可視化、分子は紫外-可視など、検出器によって記録されます。

エレクトロフェロ情報の範囲をもたらすことができます。このような多くの異なる化合物は、どのように提示サンプル、および各物質の量で。

キャピラリー電気泳動の簡単なあらすじを見た今、研究室で実行する方法を見てをみましょう。

まず、キャピラリー電気泳動装置とコンピューターをオンにします。ウォーム アップを許可する UV 検出器に切り替えて。

実験を実行するためのパラメーターを設定します。まず、カートリッジとサンプルの保管温度を設定し 35 ° C、214 に UV 検出波長 nm。

次に、2 つの洗浄手順を設定します。最初のリンスは、毛細血管壁にシラノール基がプロトン化されるように水酸化ナトリウムです。2 回目のすすぎは、毛細血管を平衡に実行バッファーを使用します。5 0.5 psi で注入するサンプルを次に、設定 s。

電気泳動のステップを設定するには、分離の電圧を選択します。この場合においては、20 を使用 kV 電界が正入口と出口に負であることを意味、通常の極性を使用して 5 分。

まず、ソーダ成分アスパルテーム、カフェイン、および水にあたり百万部分を 500 で安息香酸の原液 50 mL を準備します。

貯蔵液から 150 ppm アスパルテーム、カフェイン、150 ppm、100 ppm 安息香酸標準溶液を作る。

50、100、150、200 ppm でカフェインの 4 標準ソリューションを行います。これらのサンプルは、較正曲線を作成する使用されます。詳細については、このコレクションのビデオ較正曲線を参照してください。

最後に、窒素を脱ガス、ソーダ サンプルを準備します。希釈ソーダ サンプルと分析されます。

バイアル ホルダーに標準またはソーダのいずれかのサンプルを含むバイアルを配置します。サンプル ホルダー同様に実行バッファーと水酸化ナトリウム洗浄液を含むバイアルを配置します。それぞれの場所を記録しておきます。

CE 機器のソフトウェアで 2 つのリンス ソリューションおよび最初のサンプルバイアルを含むスロットを指定します。今、最初のサンプルを実行します。

組み合わせ標準、4、カフェイン濃度および定期的に実行し、ダイエット ソーダ サンプル入力のバイアルを変更をします。

すべてのソリューションが分離されている場合は、データを分析します。

まず、ソーダ サンプルのピークを識別するのに基準を使用します。3 つのピークを基準にダイエット ソーダ サンプルの観察の比較は、安息香酸、アスパルテーム、カフェインはダイエット ソーダで存在を示しています。通常のソーダ サンプル カフェイン ピークだけはアスパルテームと安息香酸、現在、ピークです。

各カフェイン標準液のピーク面積を計算し、較正曲線を作成します。カフェインの検量線は、各サンプルに含まれるカフェインの濃度を計算する使用できます。

キャピラリー電気泳動は、学術および産業設定で多くの専門の版のために使用されます。

CE は、製薬業界の品質管理試験の 1 つのコンポーネントとして使用されます。任意の側の製品が存在するかどうか参照してくださいにキャピラリー電気泳動による薬、小さな分子や生物学的製剤のいずれかを実行できます。蛋白質が正しく折られるかどうかを決定するも使えます折りたたみとして蛋白質充満に影響することができます。

CE は、DNA を分離する使用できます。マイクロウェル プレートと毛細血管の複数のアレイを使用して、研究者は、ここで示すように単一の実験のスループットを向上できます。DNA のフラグメント 1 塩基対までの解像度のサイズに基づいて分離を行った。これは DNA の配列のフラグメントを潜在的な遺伝的疾患を診断するために使用限定番号の変形のようなその他のパラメーターを決定すると共に、可能になります。

タンパク質は、化学的に別の場所に接続されている各種の官能基によって変更できます。同じ蛋白質の別のコピー、電荷と各蛋白質のサイズを変更するさまざまな変更によって異なります。浄化された蛋白質を縦貫する質量分析計に接続されている CE に変更が存在し、タイプおよび変更の場所基づく蛋白質を区切ることができます。

ゼウスのキャピラリー電気泳動入門を見てきただけ。今 CE が電荷と質量に基づく分子を分離する方法と、ラボで CE のサンプルを実行する方法を理解する必要があります。

見てくれてありがとう!

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