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Blut-Entzug ich

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Blutentnahme ist eine häufige Anforderung für mehrere Studien, die Mäuse und Ratten zu beteiligen. Die Wahl der Methode für die Blutentnahme bei diesen Tieren ist abhängig von vielen Faktoren wie Volumen von Blut benötigt, Häufigkeit der Probenahme, Gesundheitszustand des Tieres, entlüftet werden und der Schwierigkeitsgrad des Technikers.

Hier überprüfen wir diese Überlegungen und Gliederung Blut Sammlung Verfahren einschließlich der Retro-Orbital Auge bluten, Rute scheren und nicks, sowie Intra kardiale Blutentnahme. Andere Methoden finden Sie im zweiten Video in dieser Serie.

Vor dem Eintauchen in die Blut-Rückzug-Protokolle, betrachten wir zunächst einige allgemeine Überlegungen einschließlich Probenart, Nadelauswahl und die maximale Blutvolumen, das gesammelt werden kann. Vor der Blutentnahme aus einer Maus oder einer Ratte, muss die Art der Blutprobe erforderlich ermittelt werden. Experimentelle Verfahren könnte Vollblut, Plasma oder Serum erfordern.

Wenn Vollblut zu sammeln, muss die Probe zur Gerinnung zu verhindern, dass ein Antigerinnungsmittel hinzugefügt werden. Häufigsten verwendete Antikoagulantien gehören Heparin, Natriumcitrat und Ethylenediamine Tetraacetic Säure, abgekürzt als EDTA. Antikoagulantien können direkt in die Spritze zur Beschichtung von Oberflächen geladen werden. Dies ermöglicht Kontakt der Antigerinnungsmittel direkt, wie das Blut gezeichnet wird, helfen bei der Vorbeugung der Blutgerinnung. Da Nagetier Blut schnell gerinnt, ist es wichtig, dass das richtige Verhältnis von Antigerinnungsmittel Blut verwendet werden. Plasmagewinnung erfordert Zentrifugieren Vollblut mit Antigerinnungsmittel. Nach der Drehung ist die transluzente Flüssigkeit über der WBC und Thrombozyten Ebene Plasma. Es enthält Fibrinogen und andere Gerinnungsfaktoren. Auf der anderen Seite wird Serum von Vollblut Probe ohne Antikoagulantien gesammelt. Und weil die Probe geronnen ist, das Serum, das die Top-Spieler ist, enthält keine Fibrinogen oder andere Gerinnungsfaktoren.

Nadelauswahl basiert auf der Größe des Tieres und die Website der Venenpunktion. In der Regel große Bohrung Nadeln verursachen weniger Schäden an Blutzellen und ermöglichen eine schnellere Blutentnahme; sind aber eher Schiff Schaden verursachen. Länge der Nadel sollte auch berücksichtigt werden. Wenn eine Nadel zu lang ist, könnte es umständlich zu bedienen, oder Blut könnte anfangen, während noch im Inneren der Nadel zu gerinnen. Die Wahl der Größe reicht von 18 bis 29 Manometer und 0,5 bis 1,5 Zoll in der Länge. Die entsprechende Nadelstärke für jede Methode wird im Abschnitt "Vorgehensweise" diskutiert werden.

Schließlich wegen der geringen Größe der Nagetiere gibt es eine maximale Menge Blut, die aus einer einzigen Blutprobe gesammelt werden kann, die nicht für den Organismus ernsthaft schädigen wird. Blutabnahme könnte ohne oder mit Flüssigkeitsersatz - in der Regel mit physiologischer Kochsalzlösung 0,9 %. Die Obergrenze in jedem Fall wird im nachfolgenden Text Protokoll aufgeführt. Darüber hinaus einige Experimente erfordern mehrere Musterkollektion und in solchen Fällen zusammen mit Flüssigkeitsersatz Tier benötigen Zeit dazwischen, Blutkörperchen sowie wieder aufzufüllen. Wiederum gibt es ein Höchstbetrag, der während der seriellen Erfassung gesammelt werden kann, und die oberen Grenzwerte sind im Protokoll unten aufgeführten.

Nach der Überprüfung einige allgemeine Überlegungen, lasst uns springen in die spezifischen Blut Rückzug Techniken, beginnend mit Retro-Orbital Blutungen - eine Technik verwendet, von Wissenschaftlern um Kleinmengen aus den Gefäßen in der Nähe des Auges zu sammeln. Beachten Sie, dass die anatomische Struktur der orbitalen Bereich zwischen Ratte und Maus unterscheidet. Die Ratten haben einen Plexus der Schiffe, die sich hinter dem Auge, während die Maus hat eine Sammlung von Schiffen, die eine Retro-orbital Sinus, erstellen, wodurch es einfacher zum Ausführen dieses Verfahrens bei Mäusen.

Durch ein Rohr zur Blutentnahme zu greifen beginnen. Mikro Hämatokrit-Röhren, die 50-75 Mikroliter halten werden bevorzugt. Legen Sie einige Papiertücher oder anderen Dämmstoffen auf der Arbeitsfläche. Dies ist auf die Körperwärme des Tieres während des Verfahrens zu halten. Jetzt das Tier mit einer Narkose wie Isofluran Inhalation zu betäuben. Sobald das Tier vollständig betäubt ist, entfernen Sie es aus der Kammer und legen Sie es auf eine Seite, die im seitlichen liegen Position ist. Als nächstes legen Sie einen Finger auf die Oberseite des Kopfes und entlang der Kiefer-Linie und ziehen Sie die Haut zurück und nach unten Sie, um Auge Vorsprung zu induzieren. Vermeiden Sie Druck auf die Luftröhre, da, die Tod durch Erstickung führen kann. Anschließend legen Sie die Mikro-Hämatokrit-Röhre in der medialen Augenwinkel des Auges und leiten Sie es kaudal in einem Winkel von 30 bis 45 Grad von der Ebene der Nase. Druck und leichtes Drehen der Röhre. Dies wird Schnitt durch die Bindehaut Membranen und Bruch der okulären Plexus oder Sinus. Das Blut fließt in die Hämatokrit-Röhre durch Kapillarwirkung. Zu vermeiden, schieben das Rohr so tief, dass Sie den Knochen an der Rückseite der okulären Hohlraum getroffen. Sobald Blut zu fließen beginnt, behalten Sie Druck, ragte Auge bei. Um die Blutung zu stoppen, die Haut und lassen Sie das Auge in die Normalposition zurück. Druck zur Blutstillung zu fördern. Wiederholter Probenentnahme ermöglichen Sie, mindestens 10 Tage zwischen den Blutungen. Dadurch werden Gewebe einige Zeit um zu heilen.

Obwohl Retro-Orbital Blutung ein gängiges Verfahren ist, gibt es viele Bedenken hinsichtlich seiner Menschlichkeit. Dazu gehören Schwellungen durch übermäßige Bewegung des Rohres Hämatokrit. Dies kann wiederum dazu führen, dass den Augapfel Vorsprung und behindern die Schließung des Augenlids was Hornhaut trocknen, Schäden und Schmerzen, die kratzen und Selbstverstümmelung auslösen können. Falsche Platzierung der Hämatokrit Röhre kann den Sehnerv, was zu Blindheit trennen. Eine weitere mögliche Komplikation ist, dass das Auge aus der Umlaufbahn, so dass die Augenlider fallen hinter den Augapfel gezwungen werden kann. Darüber hinaus können Probleme ergeben sich aus den Bruch der fragilen Umlaufbahn Knochen, Durchdringung des Augapfels, die wiederum den Verlust der Glaskörper oder die Bildung von einem Hämatom hinter dem Auge, das in extremen Schmerzen führen kann. Trotz all dieser Bedenken ist, wenn eine Fachkraft die Prozedur führt und das Tier vollständig betäubt ist, Retro-Orbital Blutungen eine wirksame Methode zur Blutentnahme bei Nagetieren.

Jetzt betrachten wir die Überlegungen und Verfahren für die Rute Blutungen, wodurch eine serielle Probenahme von Kleinmengen. Das Gerät benötigt für dieses Verfahren ein Skalpell steril Nr. 11 gehören. Schere sollte nicht verwendet werden, weil der Schnitt mit einer Schere Zerkleinern ist, die Förderung der Blutgerinnung und Blutfluss reduzieren können. Andere Instrumente sind ein Zurückhaltung-Schlauch, der das Tier Schweif zuzugreifen; saugfähiges Papierhandtücher; Sammlung oder Hämatokrit Röhren und blutstillenden Puder - Blutstillung unterstützen.

Starten Sie durch die Sicherung des Tieres in das Rohr Zurückhaltung. Wischen Sie dann das Heck mit warmem Wasser, um Schmutz und leichten Vasodilatation verursachen. KEIN verwenden Sie heißes Wasser. Die Rute zu erweitern und mit der Skalpellklinge Schnipp zum Ende des Hecks, das Blut mit Hämatokrit oder Sammlung Röhren zu sammeln. Das Heck kann gestreichelt oder "gemolken" von Rump, Tipp: um die Durchblutung zu fördern. Dies verringert jedoch die Qualität der Probe.

Um die Blutung zu stoppen, Druck auf die Schwanzspitze mit einem Tupfer. Die blutstillenden Puder kann zur Blutstillung zu erreichen. Überprüfen Sie die Tiere alle 5 bis 10 Minuten um sicherzustellen, dass die Hämostase erreicht worden ist, die nach der wiederholten Entnahme verzögert werden könnte. Die Probe von einem Schweif Snip kann arteriellen und venösen Blut zusammen mit Gewebe Produktkontamination enthalten. Allerdings ermöglicht dieses Verfahren für die Blutentnahme für serielle Sammlungen durch Störung der Schorf oder Klumpen von den ursprünglichen Schnitt am Ende der Rute.

Eine alternative Blut Erfassungsmethode auf eine Heck-Snip ist die Rute Schiff Nick, die relativ weniger invasiv ist. Hierzu verwenden die gleichen Skalpellklinge machen Sie einen kleinen Schnitt direkt über die seitlichen Schweif Vene, etwa zwei Drittel der Abstand von der Bürzel. Blut kann als mit Schweif Snips, Sammlung oder Hämatokrit Rohre gesammelt werden. Und es ist zwingend notwendig, um die Hämostase zu gewährleisten, indem Druck auf die Website und das Tier alle 5-10 Minuten nachzuprüfen. Jedoch wie bei den Schweif Snip, können die Proben mit Tissueprodukte kontaminiert sein.

Oft Studien, die eine nicht-überleben große Blutprobe erforderlich, die durch Entbluten über eine Intra Herz bluten oder der kaudalen Vena Cava erreicht ist.

Für Intra kardiale Methode bei Mäusen benötigen Sie eine 3 cc Spritze mit einem 22 -25 g-1 Zoll-Nadel. Und bei Ratten, eine 10-12 cc Spritze mit einer 18-Gauge-Nadel 1,5 Zoll wird bevorzugt. Siehe unten, um zu verstehen, warum das Protokoll eignen sich diese Bedürfnisse und Spritzen.

Starten von euthanizing das Tier mit Kohlendioxid. Halten Sie nach Euthanasie das Nagetier mit dem Körper vertikal hängend durch das Genick. Dieses zurückhalten ist entscheidend, wie der Körper sein sollte, direkt auf die Durchbiegung des Herzens oder eine Verdrehung der Brust zu verhindern. Beachten Sie, dass das Herz befindet sich etwa auf dem Niveau des Ellenbogens. Der Einschubseite ist in der Kerbe links neben der Xiphoid, parallel zur Wirbelsäule und unter den Rippen.

Stechen Sie die Nadel, Abschrägung, in die Brust und das Herz zu durchbohren. Wenden Sie leichten Gegendruck mit der Spritze. Wenn die Nadel im Herzen ist, fließt Blut in die Spritze. Warten Sie, bis das Blut das Fass gefüllt hat, vor dem Hinzufügen von zusätzlichen Gegendruck. Etwa kann die Hälfte des gesamten Blutvolumens aus einer Maus oder Ratte durch Herzpunktion abgeholt werden. Dies entspricht etwa 1 mL Blut aus einer durchschnittlichen Maus und ca. 10 mL Blut aus einer durchschnittlichen Ratte

Eine alternative Position ist dorsal liegen, wenn die seitlichen Ansatz verwenden. In diesem Fall platzieren Sie die Nadel zwischen den Rippen des Tieres links. Der Einstieg ist gegen den Punkt des Ellenbogens auf der Brustwand gemessen. Stechen Sie die Nadel, Abschrägung, senkrecht zur Ebene der Tabelle auf einen Punkt in der Mitte auf der Brustwand. Wenden Sie leichten Gegendruck mit der Spritze. Wenn die Nadel in das Herzblut fließt in die Spritze. Wieder warten Sie, bis das Blut das Fass gefüllt hat, vor dem Hinzufügen von zusätzlichen Gegendruck. Beachten Sie, dass in beiden Positionen, übermäßige Gegendruck das Herz Verschließen der Nadel Abschrägung und stoppen Blutfluss in die Spritze zusammenbrechen kann.

Eine weitere Methode zur kardialen Blut zu sammeln ist durch den kaudalen Vena Cava. Die notwendige Ausrüstung für dieses Verfahren sind eine geeignete Spritze mit einer richtigen Größe Nadel befestigt; Schere für die Eröffnung der Bauchhöhle, kleine atraumatische Daumen Zange und Gaze Schwamm. Diese Technik erfordert, dass das Tier tief narkotisiert und in Narkose während des Verfahrens gewartet werden. CO2-Narkose ist keine Option, wie das tierische Herz für dieses Verfahren schlägt sein muss. Legen Sie das Tier in dorsal liegen Position, und sichern Sie die Glieder auf der Plattform zu. Die Gliedmaßen sollte vom Körper ausgedehnt werden.

Jetzt heben Sie die Haut mit Zange und verwenden Sie Schere, um einen kleinen quer-Schnitt durch die Haut oberhalb des Beckens in Weibchen oder Vorhaut bei Männern zu machen. Als nächstes geben Sie den Punkt der Schere zum Schnitt und eine Mittellinie Einschnitt durch die Haut aus dem Becken oder Vorhaut, die Xiphoid. Heben Sie mit der Haut seitlich reflektiert den Muskel und machen Sie einen kleinen quer-Schnitt durch den Muskel oberhalb der Haut Schnitt.

Platzieren Sie den Punkt von der Schere in den Bauch und nehmen Sie einen Mittellinie Schnitt durch den Muskel an der Xiphoid vor. Achten Sie darauf, die Schere Punkt nach oben, um zu verhindern, dass alle Organe schneiden Winkel. Schnitt quer entlang der Kurve der Rippen auf jeder Seite. Achten Sie darauf, dass Sie nicht die Leber punktieren. Sanft bewegen den Darm des Tieres links um die hintere untere Hohlvene verfügbar zu machen. Legen Sie einen Tupfer auf die Leber und ruhen Sie Ihren zeige- und Mittelfinger auf ihm. Mit der anderen Hand die Nadel, Abschrägung bis in die untere Hohlvene, auf halbem Weg zwischen der Kreuzung der renalen Schiffe und Beckenkamm Bifurkation. Ziehen Sie langsam das Blut während der Druck auf die Leber.

Vermeiden Sie Handbewegung, da das Schiff Bruch verursachen könnte. Auch kann zu schnellen Blutentnahme das Schiff auf der schräge verschließen die Öffnung und verhindert Blutentnahme Zusammenbruch führen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist die Fähigkeit, eine sterile Probe zu sammeln, da die Nadel durch die Haut nicht übergeben wird.

Zu guter Letzt schauen wir einige Anwendungen dieser Blut-Rückzug-Techniken. Immuno-Onkologie ist ein aufstrebendes Gebiet, und Forscher auf diesem Gebiet führen oft Blutentnahme um die Immunzellen in verschiedenen Stadien der Entwicklung von Krebs zu studieren. Z. B. sammelte hier Forscher Herz Blut von Krebs-tragenden Mäusen zu isolieren und zu quantifizieren, Neutrophile um zehn, zwanzig und dreißig Tagen nach Tumor Engraftment.

Auf der anderen Seite wird die Blutzusammensetzung auch häufig von Physiologen untersucht. Wie in dieser Studie waren Forscher bei der Bewertung der Nierenfunktion bei diabetischen Tieren interessiert. Um das zu tun, injiziert diese Wissenschaftler zunächst einen Farbstoff in eine Diabetes-Tiermodell. Als nächstes verwendet sie dann Schweif Snip Methode sammeln Blut zu mehreren Zeitpunkten auszuwertende Farbstoff-Konzentration im Blut, die letztlich zur glomerulären Filtrationsrate berechnen, die den Unterschied der Nierenfunktion nach Diabetes hervorgehoben verwendet wurde Induktion.

Zu guter Letzt verwenden Stammzellen Forscher Blutproben bewerten den Erfolg der Eingliederung der Spenderzellen in dem System des Empfängers. Hier verpflanzt die Ermittler zunächst Knochenmarkzellen von einer männlichen Maus in ein Wildtyp und gentechnisch veränderten weibliches Tier über die Rute Vene Injektion. Als nächstes sammelten sie Blut von den Retro-orbital Sinus der Empfänger Maus die genomische DNA Blut Zellen mittels Polymerase-Kettenreaktion zu studieren. Dies bot den Prozentsatz der Spender Zellen Engraftment in zwei Arten von Tieren.

Sie habe nur Jupiters erste Rate auf Blut Rückzug Techniken beobachtet. Finden Sie das nächste Video Serie, wie Sie andere verwendeten Techniken der Blutentnahme bei Labortieren durchführen zu überprüfen. Wie immer vielen Dank für das ansehen!

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