Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content.

Rodent Handling and Restraint Techniques
Science Education (Lab Animal Research)
Rodent Handling and Restraint Techniques
Compound Administration IV
Science Education (Lab Animal Research)
Compound Administration IV
 
Automatic Translation
Add to Playlist
Click here for the English version

נסיגת דם II

Automatic Translation

Overview

מקור: קיי סטיוארט, RVT, RLATG, CMAR; ואלרי א. שרודר, אר.די.ג'י, אר-אל-ג'י. אוניברסיטת נוטרדאם, IN

איסוף הדם מעכברים וחולדות לניתוח יכול להיעשות באמצעות מגוון שיטות. לכל שיטת איסוף יש וריאציות בסוג האיפוק הנדרש, ב פולשניות ההליך ובצורך בהרדמה כללית. 1 מבחינה היסטורית, השימוש בחלל הסינוס הרטרו-מסלולי שימש, אך לא ללא ויכוח. המחלוקת הקשורה לנזק הפוטנציאלי לרקמות, או אפילו לעיוורון, שנגרם על ידי דימומים רטרו-מסלוליים הובילה להתפתחות שיטות דימום פנים ורידים תת-קרקעיים בעכברים. איסוף דם מהווריד הספני הן בעכברים והן בחולדות הוא טכניקה נוספת שפותחה. הליכים אלה אינם דורשים הרדמה ולכן מתאימים כאשר השימוש בהרדמה עלול לבלבל את תוצאות הדם או נתונים אחרים.

Principles

יש וריד פנים בעכבר שעובר מקלעת העין על הלחי, וריד תת-קרקעי העובר לאורך הלסת התחתונה. שני כלי הדם מתכנסים לתוך וריד הצוואר ממש מתחת לקו הלסת, מה שהופך אותם לנגישים בקלות. ניתן לקחת דגימות סדרתיות מכל כלי שיט על ידי לסירוגין בצד שבו נעשה שימוש. עם זאת, אף צד לא צריך לשמש לעתים קרובות יותר מאשר כל 5-7 ימים. 2

יש לנקוט באמצעי זהירות בעת ביצוע דימום בעורק הפנים. כמו תעלת האוזן ממוקמת ליד וריד הפנים, אם קצה lancet מכוון caudally, התעלה תהיה פירסינג. התוצאה תגרום לאפקט סיפון שיגרום לדם להגיע מהאוזן. למרות זאת, עדיין ניתן לאסוף דם, והעכבר לא ייגרם נזק קבוע. עם זאת, זה עלול לגרום לחיה לנער את הראש שלה, מתיז דם בכלוב.

כאשר מדממים מן הווריד submandibular, עומק הכניסה של המחט הוא קריטי. עומק החדרה העולה על 4-5.5 מ"מ עלול לגרום לטראומה לשרירים, לעצבים ולכלים אחרים הנמצאים בחלל הראש, הצוואר והאראלי. סיבוכים הבאים כוללים דימום מוגזם וכתוצאה מכך היפובולמיה, טביעה הנגרמת על ידי הנוזל בפה, ונזק למבנים אוראליים המפריעים לאכילה ושתייה.

ריסון החיה חיוני לדימום מוצלח הן עבור וריד הפנים והן עבור הליכי וריד תת-קרקעיים. אם האחיזה על הקשקוש הדוקה מדי, זרימת הדם לווריד הפנים יכולה להיות מוגבלת. התוצאה תגרום לירידה בנפח שנאסף. נפחי האיסוף ישתנו הן בוריד הפנים והן בדימום הווריד התת-קרקעי. חובה להגביל את נפחי הגבייה כך שהם לא יעלו על הנפח המרבי לאיסוף דם הישרדותי בהתאם למדיניות המוסדית ופרוטוקול בעלי חיים מאושר. הבטחת hemostasis פעם הסכום הרצוי נאסף ימנע אובדן דם נוסף או מוגזם. 2

איסוף דם מהווריד הספני הוא חלופה מעשית נוספת לדימומים סדרתיים. הווריד הספני לרוחב הוא כלי שטחי הפועל באופן דורי, ולאחר מכן לרוחב, על פני מפרק הטרסל. 3 למרות הליך זה עשוי להיות מקובל יותר מבחינה אסתטית מאשר דימום רטרו-מסלולית, בגלל ההכנה הנדרשת - ולא שימוש בהרדמה עבור שיטה זו - זה עשוי למעשה להיות מלחיץ יותר עבור החיה. סיבוכים שיכולים לנבוע מדימום סאפני קשורים לאתר הדקירה. אם ניקוב המחט אינו ישירות על הכלי, דם עלול לבריכה תת עורית, וכתוצאה מכך שטף דם. חבלות, זיהום אפשרי, והעדפה של האיבר הם בעיות אפשריות אחרות. שיטה זו דורשת הכשרה, אך היא נתפסת בקלות. אמצעי אחסון שנאספו בשיטה זו הם בין 10-150 μL, בהתאם לתדירות הדגימה. 4 הדגימות משתנות באיכותן מכיוון שהן עשויות להכיל מוצרי רקמות. לא יותר מארבע דגימות דם יש לקחת בתוך פרק זמן של 24 שעות מאותה רגל.

וריד הירך הוא אפשרות נוספת לאיסוף דם על חולדה. וריד הירך פועל על ההיבט המשיאלי של הרגל האחורית מהמפשעה למפרק הברך לפני חציית הברך והופך לסאפנוס לרוחב, מה שהופך אותו לנגיש בקלות. למרות הליך זה יכול להיעשות ללא שימוש בהרדמה, זה דורש שני אנשים אדם אחד יחזיק את הרגל בנקודה שבה הרגל והבטן להתחבר לאסם את הווריד, בעוד השני מבצע את venipuncture ואוסף את הדם.

היתרון בשימוש בווריד הירך הוא כי נפח גדול יותר נאסף ממנו בקלות רבה יותר מאשר מן הווריד saphenous. עם זאת, מכיוון שריד הירך גדול, הוא נוטה להיווצרות שטף דם. זה יכול להחמיר על ידי אחיזה מוצקה מדי על הרגל, אשר יכול לגרום חבורות נוספות. בשיטת איסוף הדם הזו, יש שונות בכמות הדם שנאספה עקב דימום לאחר הסרת המחט. זה הכרחי כדי להבטיח hemostasis כדי למנוע אובדן דם מוגזם זה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Procedure

1. דימום וריד פנים בעכברים

  1. ציוד
    1. איסוף הדם הוא מגל שלל חופשי לתוך צינור דם או צינור אפנדורף. במקרים מסוימים, רצוי לאסוף דם ישירות לתוך צינורות המטוקריט.
    2. גולדן רוד lancets ייבחר על סמך הגודל המתאים עבור החיה על פי גיל ומין.
      1. Lancets נבחרים על פי הגיל / גודל של עכברים כדלקמן:
        4mm lancet: עכברים בני 3-4 שבועות (מתחת ל-15 גרם משקל גוף)
        5mm lancet: עכברים נקבה מתחת לגיל 10 שבועות (מתחת ~ 20 גרם משקל גוף)
        5mm lancet: עכברים זכרים מתחת לגיל 6 שבועות (מתחת ~ 20 גרם משקל גוף)
        5 מ"מ lancet: עבור דגימות טיפה אחת (עבור כתמי דם)
        5.5mm lancet: עכברים נקבה מעל 10 שבועות (מעל ~ 20 גרם משקל גוף)
        5.5mm lancet: עכברים זכרים מעל 6 שבועות (מעל ~ 20 גרם משקל גוף)
        5.5 מ"מ lancet: דגימות גדולות
  2. איפוק
    1. עכברים מרוסנים בטכניקת השרבוט.
    2. חשוב למזער את תנועת הראש מצד לצד. זה מבטיח ווניפונקטור מדויק ובטוח עם הרומח.
  3. נסיגת דם
    1. הרומח בגודל הנכון מוחזק בניצב לפני השטח של העור.
    2. נקודת הרומח מעט בזווית, כאשר הקצה פונה לכיוון האף.
    3. להב הרומח משמש בצורה הטובה ביותר בתנוחה אנכית.
    4. בעת ריסון העכבר, אתר את האזור המשוער של וריד הפנים על ידי מדידת אורך העין מתחת לקנתוס לרוחב ורוחב העין.
    5. עם הנקודה של lancet, בעדינות להרגיש את הנקודה שבה עצם הלסת מסתיימת.
    6. לקבלת דיוק טוב יותר בניקוב כלי השיט, מקם את העכבר בנסיגה לרוחב.
    7. לנקב את העור לכתף של lancet בשלב זה. זה נעשה בדחיפה חזקה ולא כזריקת חץ.
    8. עם הסרת הרומח, הדם יתחיל לזרום.
    9. כדי לסייע בזרימת הדם, מקם את העכבר עם הראש נמוך יותר מהלב.
    10. לאסוף את הדם בכלי האיסוף הרצוי.
    11. כתם אתר הדקירה ולחץ שחרור על הקשקוש עבור hemostasis.

Figure 1
איור 1. דימום ורידים בעכברים.

2. דימום תת-מנדיבל בעכברים: למרות שדומה מאוד לטכניקה לדימום בווריד הפנים, יש וריאציות בציוד והבדלים עדינים בהליך הדימום הזה.

  1. ציוד
    1. איסוף הדם הוא מגל שלל חופשי לתוך צינור דם או צינור אפנדורף. במקרים מסוימים, רצוי לאסוף ישירות לתוך צינורות המטוקריט.
    2. 18-22 מחטי מד נבחרים על סמך הגודל המתאים עבור החיה על פי גיל ומין.
      1. מחטים נבחרות לפי הגיל /גודל של עכברים כדלקמן:
        22 מד: 3-4 שבועות עכברים (מתחת 15 גרם משקל גוף)
        20 מד: עכברים נקבה מתחת 10 שבועות (מתחת ~ 20 גרם משקל גוף)
        20 מד: עכברים זכרים מתחת לגיל 6 שבועות (מתחת ~ 20 גרם משקל גוף)
        20 מד: עבור דגימות טיפה אחת (עבור כתמי דם)
        18 מד: עכברים נקבה מעל 10 שבועות (מעל ~ 20 גרם משקל גוף)
        18 מד: עכברים זכרים מעל 6 שבועות (מעל ~ 20 גרם משקל גוף)
        מד 18: דגימות גדולות
  2. איפוק
    1. עכברים מרוסנים בטכניקת השרבוט.
    2. חשוב למזער את תנועת הראש מצד לצד. זה מבטיח ווניפונקטור מדויק ובטוח עם המחט.
  3. נסיגת דם
    1. המחט מוחזקת בניצב לפני השטח של העור.
    2. בעת ריסון העכבר, אתר את האזור המשוער של הווריד התת-קרקעי בנקודה שבה קו מפינת הפה חוצה קו מהקנות לרוחב של העין. זה עולה בקנה אחד עם גומה קטנה וחסרת שיער שנמצאה קאודלית בפינת הפה וקצת מתחת לקו הלסת.
    3. לקבלת דיוק טוב יותר בניקוב כלי השיט, מקם את העכבר בנסיגה לרוחב.
    4. לנקב את העור עם קצה המחט בשלב זה. זה נעשה בדחיפה חזקה ולא כזריקת חץ.
    5. המחט אינה מוכנסת מעבר לקצה שיפוע.
    6. עם הסרת המחט, הדם יתחיל לזרום.
    7. כדי לסייע בזרימת הדם, מקם את העכבר עם הראש נמוך יותר מהלב.
    8. לאסוף את הדם בכלי האיסוף הרצוי.
    9. כתם אתר הדקירה, ולשחרר לחץ על הקשקוש עבור hemostasis.

Figure 2
איור 2. דימום וריד תת-קרקעי בעכברים.

3. דימום סאפני

  1. ציוד
    1. פלסטיק שקוף, קונוסים ריסון גמיש יכול לשמש גם לעכבר או לעכבר. עבור עכברים, שונה 50 מיליליטר צינורות חרוט פלסטיק יכול לשמש לאיפוק. עבור חולדות, צינורות ריסון פרספקס שונה - עם חריץ רחב מספיק כדי להאריך את הרגל האחורית - ניתן להשתמש.
    2. בעת ניצול חרוט הפלסטיק, הוא נמדד כנגד אורך הגוף של החיה, וחור אליפסה נחתך ברמה של הירך.
    3. צינור חרוט יכול להיות שונה עבור עכבר עבור שיטת איסוף דם זו על ידי חיתוך קצה הצינור כדי לאפשר חור נשימה. חריץ נחתך מקצה המכסה של הצינור ברוחב של כ-1/2 אינץ' ובאורך 2 אינץ'. הקצוות מכוסים בסרט בד או חלקים לבטיחות בעלי חיים.
    4. חוסם עורקים מיוצר באמצעות מזרק 3 סמ"ק ואורך של 2-0 תפר שאינו ניתן להפרעה. 3
    5. משחה אנטיביוטית משולשת או ג'לי נפט לבן משמש כמחסום חסין לחות על העור.
    6. מחט 22 מד הוא הגודל המועדף עבור venipuncture.
    7. דם נאסף ישירות לתוך צינורות המטוקריט.
  2. איפוק
    1. קונוסים מפלסטיק גמישים
      1. העכבר או החולדה ממוקמים לתוך האף חרוט ראשון.
      2. קצה החרוט מקופל וסגור באמצעות קליפ קלסר קטן כדי למנוע מהחיה לצאת מקונוס האיפוק.
      3. הרגל האחורית נמשכת בעדינות דרך פתח הסגלגל למפשעה.
    2. צינור חרוט לעכברים
      1. העכבר ממוקם לתוך האף של הצינור.
      2. הרגל האחורית מונחית בעדינות לתוך החריץ.
      3. האצבע האמצעית ממוקמת מעל קצה הצינור כדי למנוע מהעכבר לצאת מהצינור.
      4. האצבע והאגודל מייצבים את רגל העכבר.
    3. צינור ריסון פרספקס לחולדות
      1. החולדה ממוקמת לתוך האף של הצינור.
      2. הרגל האחורית מונחית בעדינות לתוך החריץ.
      3. קצה הצינור מאובטח כדי למנוע מהעכברוש לסגת ולצאת מהצינור.
      4. האצבע והאגודל מייצבים את רגל החולדה.
  3. נסיגת דם
    1. השיער מוסר מההיבט הרוחב של הרגל מהמשכן אל המחניק. זה יכול להיעשות על ידי מריטת, גילוח, או באמצעות קרם depilatory.
    2. לאחר הסרת השיער, כמות קטנה של משחה מוחלת ומופצת בשכבה דקה מאוד על האזור ללא שיער.
    3. חוסם העורקים מוחל ככל האפשר ומהודק.
    4. כלי השיט הספני הרץ על פני השטח החיצוני של הרגל מהברך לקרסול יתחיל להתמלא ויהפוך מורם וקל לדמיין.
    5. המחט מוחזקת בניצב אל פני השטח של העור ישירות מעל כלי הדם. לנקב את הכלי. היזהר לא להכניס את המחט עמוק לתוך הרגל, כדי למנוע ניקוב השריר או להכות את העצם.
    6. הדם יעלה על פני הרגל לאיסוף עם צינור ההמטוקריט.
    7. לאחר שהדם נאסף, לשחרר את חוסם העורקים ולהפעיל לחץ על הניקור עבור המוסטזיס.
    8. לאחר שהדימום נפסק, הסירו את החיה מהאיפוק והחזירו אותה לכלוב הביתי.

Figure 1
איור 3. דימום ורידים ספנוס בעכברים.

4. וריד הירך לחולדות

  1. ציוד
    1. דם נאסף לתוך צינור המטוקריט.
    2. משחה אנטיביוטית משולשת נדרשת כדי ליצור מחסום בין העור / השיער ואת טיפת הדם.
    3. מחט 22 מד משמש לנקב את הווריד.
    4. קוצץ שיער קטן ונייד עם להב ברוחב של כ-1 אינץ' משמש לגיצוץ השיער מהרגל.
  2. איפוק
    1. חולדות מרוסנות באמצעות חרוט ריסון פלסטיק ברור וגמיש.
    2. קונוס הפלסטיק נמדד כנגד אורך הגוף וחור אליפטי חתוך בגובה הירך. החרוט נחתך כך שניתן יהיה לחתוך את הרגל האחורית עם גישה לווריד.
  3. נסיגת דם
    1. השיער מגולח מפני השטח הפנימיים של הרגל מהמפשעה לברך.
    2. משחה אנטיביוטית משולשת מוחלת בשכבה דקה באתר הדקירה.
    3. האדם האיפוק חוסם את הווריד ומחזיק את החולדה עם המשטח הפנימי של הרגל מול הפלבוטומיסט.
    4. השתמש במחט כדי לנקב את הווריד. המחט מוחזקת בניצב לכלי הדם והנקב נעשה ישירות על הווריד.
    5. הנקב נעשה קרוב ככל האפשר לברך, ומאפשר דגימה נוספת של קדמת לאתר איסוף הדם הראשון.
    6. הכלי שטחי. לכן, עומק הניקור לא צריך להיות עמוק יותר מאורך שיפוע המחט.
    7. כדי לסייע בזרימת הדם, מקם את החולדה עם הרגל נמוכה יותר מהלב.
    8. לאסוף את הדם בצינורות המטוקריט כפי שהוא חרוזים על פני העור.
    9. לשחרר לחץ על הרגל ולהפעיל לחץ על אתר ניקוב כדי להשיג hemostasis.

Figure 4
איור 4. דימום וריד הירך בחולדות.

איסוף דם מעכברים וחולדות נחוץ למגוון רחב של מחקרים מדעיים, וחוקרים פיתחו שיטות שונות להשגת מטרות ניסיוניות ספציפיות.

בפרק הראשון, דנו בשיקול נסיגת הדם הכללי ובדקנו את הדימום הרטרו-מסלולי בעין, חתכי זנב וחתכים, כמו גם שיטות איסוף דם תוך-לבביות. כאן, נתווה את הנהלים לאיסוף דם מוורידים בפנים, תת-קרקעיים, סאפניים ויריתיים. שיטות אלה הן פחות פולשניות ואינן דורשות הרדמה, מה שהופך אותן לשיטות בחירה כאשר השימוש בהרדמה עלול לבלבל את תוצאות הדם או נתונים אחרים.

בואו נתחיל עם ההליך להשגת דגימת דם מווריד פנים מורין. על העכבר, יש וריד פנים נגיש בקלות כי פועל על הלחי. התחל על ידי בחירת הציוד המתאים להליך. בעיקרון, אתה צריך צינור צנטריפוגה קטן לאיסוף דם ו lancet, אשר זמין בגדלים שונים. בחירת lancet הנכון תלויה בגיל, מין, משקל גוף של החיה ואת גודל המדגם שיש לאסוף. עיין בפרוטוקול טקסט לקבלת פרטים אודות בחירת Lancet.

התחל את ההליך על ידי ריסון החיה באמצעות טכניקת הקשקוש. ריסון נכון ממזער את התנועה מצד לצד של הראש ומסייע בהבטחת ווניפונקטור מדויק ובטוח עם הרומח. אם האחיזה הדוקה מדי, זרימת הדם עשויה להיות מוגבלת וכתוצאה מכך נפח מופחת שנאסף. לאחר שבעל החיים מרוסן, אתר את האזור המשוער של וריד הפנים על ידי מדידת אורך העין מתחת לקנתוס לרוחב ורוחב העין. עם קצה הרומח מרגיש בעדינות את הנקודה שבה עצם הלסת מסתיימת. לקבלת דיוק טוב יותר בניקוב כלי השיט, ייתכן שתרצה למקם את העכבר על צידו.

עכשיו, באתר ההחדרה, להחזיק את lancet בניצב אל פני העור עם הקצה פונה מעט לכיוון האף. זה קריטי, כי אם קצה lancet מכוון caudally, תעלת האוזן יהיה פירסינג גרימת דימום מהאוזן. כדי לנקב את הווריד, להחיל דחיפה מוצקה ולנקב את העור עד הכתף lancet. עם ההסרה, הדם יתחיל לזרום. כדי לסייע בזרימה, מקם את החיה עם הראש נמוך יותר מהלב. כדי לעצור את הדימום, כתם את אתר הדקירה כדי להשיג hemostasis ולמנוע אובדן דם מוגזם. לבסוף, לשחרר את הלחץ על הקשקוש ולהחזיר את החיה לכלוב שלה. שים לב כי נפחי האיסוף ישתנו, אך חובה לא לחרוג מהנפח המרבי לאיסוף דם הישרדותי. עיין בפרוטוקול הטקסט של סרטון הנסיגה בדם אחד לקבלת פרטים על נפח האיסוף המרבי המומלץ. ניתן לקחת דגימות טוריות על-ידי לסירוגין בצד שבו נעשה שימוש. אף אחד מהצדדים לא צריך לשמש לעתים קרובות יותר מאשר כל 5-7 ימים.

עכשיו בואו נסקור את שיטת הדימום התת-קרקעית של הווריד. למרות שזה דומה מאוד לטכניקה לדימום וריד הפנים, יש וריאציות בציוד והבדלים עדינים בהליך הדימום.

הווריד התת-קרקעי פועל לאורך הלסת התחתונה של העכבר ומתכנס עם וריד הפנים לווריד הצוואר. במקום lancet, שיטה זו מבוצעת באמצעות מחטים. אבל בדומה לרומחים, בחירת מד המחט תלויה בגיל, מין, משקל החיה וגודל המדגם - ראה פרוטוקול טקסט לפרטים.

כדי להתחיל, לגרד את החיה באותו אופן כמו לדמם וריד הפנים, כך שיש תנועה מינימלית מצד לצד של הראש. זוכר - אחיזה הדוקה מדי עשויה להקטין את נפח איסוף הדם. תוך כדי ריסון העכבר, דמיינו קו מפינת הפה על פני הפנים וקו מהקנטל לרוחב העין. נקודת ההצטלבות של קווים אלה היא האזור המשוער של הווריד התת-קרקעי. זה עולה בקנה אחד עם גומה קטנה ללא שיער שנמצאה caudal לפינה של הפה וקצת מתחת לקו הלסת.

לדיוק טוב יותר, מקם את החיה בנסיגה רוחבית (3.6.1). לאחר מכן, להחזיק את המחט בניצב אל פני השטח של העור ולהכניס אותו עם דחיפה מוצקה. אל תכניסו את המחט מעבר לקצה העגומים, שכן עומק הכניסה גדול מזה עלול לגרום לטראומה לשרירים, לעצבים וכלי דם אחרים שנמצאים בחלל הראש, הצוואר והאולד. עם הסרת המחט, הדם יתחיל לזרום. כמו עבור דימום וריד הפנים, למקם את העכבר עם הראש נמוך יותר מהלב כדי לסייע עם זרימת הדם. לבסוף, כתם אתר הנקב כדי להשיג hemostasis ולשחרר לחץ על scruff להחזיר את החיה לכלוב שלה.

עכשיו, בואו ללמוד איך לאסוף דם מן הווריד saphenous. וריד זה הוא כלי שטחי העובר באופן דורי ולאחר מכן לרוחב על פני מפרק tarsal.

הציוד שאתה צריך עבור הליך זה כולל מכשיר מרסן, אשר יכול להיות אחד פלסטיק גמיש עבור חולדות או, עבור עכברים צינור חרוט פלסטיק 50 מיליליטר שונה יכול לשמש. שים לב שקצה הצינור נחתך כדי לאפשר חור נשימה, וחריץ ברוחב 2 אינץ' ובאורך 2 אינץ' נחתך מקצה המכסה. הקצוות מכוסים בסרט קרישה לבטיחות בעלי החיים. הליך זה דורש גם חוסם עורקים - המיוצר באמצעות מזרק 3 סמ"ק ואורך של 0-2 תפירה לא נספגת, משחה אנטיביוטית משולשת עם ספוגית - ישמש כמחסום חסין לחות בין העור לטיפת הדם, קוצץ שיער, מחט 22 מד עבור venipuncture, וצינור המטוקריט לאיסוף דם.

כדי לרסן עכבר, למקם אותו לתוך הצינור, האף הראשון. לאחר מכן, בעדינות להנחות את הרגל האחורית לתוך החריץ ולייצב אותו באמצעות האצבע והאגודל. לאחר מכן, לגלח את השיער מן ההיבט לרוחב של הרגל מן למשכן כדי לחנוק. לאחר מכן, למרוח שכבה דקה מאוד של משחה אנטיביוטית משולשת לאזור ללא שיער. לאחר מכן, להחיל את חוסם העורקים ככל האפשר להדק אותו. כלי השיט הספני העובר על פני השטח החיצוני מהברך לקרסול יתחיל להתמלא ויהפוך מורם וקל לדמיין.

לאחר מכן, להחזיק מחט 22-מד ישירות מעל כלי הדם בניצב אל פני השטח של העור. ולנקב את הכלי, נזהר לא להכניס את המחט עמוק מדי ולנקב שריר או עצם. הדם יעלה על פני הרגל לאיסוף לתוך צינור המטוקריט. לאחר שהדם נאסף, לשחרר את חוסם העורקים ולהפעיל לחץ על הניקור עבור המוסטזיס. לאחר שהדימום נפסק, הסירו את החיה מהאיפוק והחזירו אותה לכלוב שלה. אמצעי אחסון שנאספו בשיטה זו הם בין 10 ל 150 μL, בהתאם לתדירות הדגימה. ואיכות המדגם משתנה, שכן היא עשויה להכיל מוצרי רקמות. לא יותר מ 4 דגימות דם צריך להילקח בתוך פרק זמן של 24 שעות מאותה הרגל.

לבסוף, נלמד כיצד לאסוף דם מווריד הירך, שהוא אפשרות נוספת לאיסוף דם על חולדה. וריד הירך פועל על ההיבט המשיאלי של הרגל האחורית מהמפשעה למפרק הברך לפני חציית הברך ולהפוך לווריד הספני לרוחב, מה שהופך אותו לנגיש בקלות.

היתרון לדימום בעורק הירך הוא שנפח גדול יותר נאסף בקלות רבה יותר מאשר מהווריד הספני. החיסרון הוא שהליך זה, בחיה מודעת, דורש שני אנשים. הציוד הדרוש להליך זה דומה לשיטת הווריד הספני, אלא שהוא אינו דורש את חוסם העורקים, ומכשיר האיפוק המועדף הוא חרוט גמיש. כדי לבחור את החרוט הנכון, למדוד אותו נגד אורך הגוף של החיה ולאחר מכן לעשות חור אליפסה לחתוך ברמה של הירך.

כדי לרסן את החיה, מניחים אותה לתוך הצינור, האף קודם. לאחר מכן, לקפל את קצה החרוט ולסגור אותו באמצעות קליפ קלסר קטן כדי למנוע את החיה לצאת. עכשיו למשוך את הרגל האחורית דרך פתח הסגלגל כדי לקבל גישה לווריד הירך. אל תתחזו חזק מדי מכיוון שזה עלול להחמיר את היווצרות המטומה. לאחר מכן, לגלח את פני השטח הפנימיים של הרגל מן המפשעה לברך, ולהחיל שכבה דקה של משחה אנטיביוטית משולשת על האזור ללא שיער. לאחר מכן, האדם איפוק צריך לאכום את וריד הירך ולתפוס את החולדה עם פני השטח הפנימיים של הרגל מול האדם שהולך להקיז דם. מחזיק את המחט 22-מד בניצב לכלי הדם, ישירות לנקב את הווריד ולאסוף את הדם בצינורות המטוקריט כפי שהוא חרוזים על פני העור. הנקב צריך להיות קרוב ככל האפשר לברך כדי לאפשר דגימה עתידית של קדמת לאתר זה. כמו כן, ודא כי עומק הניקור אינו עמוק יותר מאורך שיפוע המחט. כדי לסייע לזרימת הדם, מקם את החולדה עם הרגל נמוכה יותר מהלב. לבסוף, לשחרר את הלחץ על הרגל ולהפעיל לחץ על אתר ניקוב כדי להשיג hemostasis ולמנוע אובדן דם מוגזם. שים לב כי באופן משמעותי יותר כמות של דם ניתן לאסוף באמצעות הליך זה.

לאחר דיון ביסודות של טכניקות איסוף דם, בואו לסקור כמה דוגמאות מדוע הליכים אלה עשויים להיות שימושיים למחקר מדעי

דם מנותח לעתים קרובות כדי לאשר את התגובה החיסונית במהלך פיתוח החיסון. כאן, החוקרים העבירו חיסון פפטיד לבעלי חיים הסובלים מסרטן שלפוחית השתן. לאחר מכן, הם אספו דם דרך הווריד התת-קרקעי והפרידו את הסרום כדי לזהות את רמות הציטוקינים השונים, המשמשים כאינדיקטורים ליעילות החיסון.

איסוף הדם מבוצע בדרך כלל גם כדי לבדוק את היעילות של טיפול על ידי לימוד סמנים ביולוגיים של המחלה האנושית, כמו רמות הגלוקוז בסוכרת. חוקרים אלה היו מעוניינים לבדוק את היעילות של טיפול גנטי חדשני המועבר דרך וריד הזנב בבעלי חיים סוכרתיים. לאחר ההזרקה, חוקרים אלה אספו דם מן הווריד saphenous במספר נקודות זמן כדי לנתח את ההשפעה של פרוטוקולי טיפול שונים על רמת הגלוקוז בדם.

לבסוף, עבור כמה ניסויים, חשוב לדעת את המצב הבסיסי של החיה, כגון רמות של דלקת או מתח. בדוגמה זו, פלזמת דם נאספה מעכברוש לפני ואחרי אירוע מלחיץ. וכפי שאתם יכולים לראות, הקורטיקוסטרון, או הורמון הלחץ, רמת גבוהה יותר בבעלי חיים עשר דקות לאחר האירוע המלחיץ.

הרגע צפית בפרק השני של ג'וב על טכניקות גמילה מדם לעכברים וחולדות. לאחר צפייה בשני הסרטונים האלה, אתה צריך להבין טוב יותר את השיקולים והנהלים לאיסוף דם מבעלי חיים אלה וכיצד הם משמשים במחקר ביו-רפואי כיום. כמו תמיד, תודה שצפית!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Applications and Summary

שיטת איסוף הדם יכולה לגרום לשינוי בניתוח המדגם. רמת המיומנות של הטכנאי המבצע את איסוף הדגימה משפיעה על איכות המדגם ועל רווחת החיה. השימוש בהרדמה יכול להשפיע גם על איכות המדגם. השיטות המתוארות כאן מבוצעות כולן ללא שימוש בהרדמה, ולכן משתנה זה בוטל. כמו כן, כל הטכניקות האלה יכולות לשמש לדגימה סדרתית עם אי נוחות מינימלית לחיה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Fernandez, I., Arantza, P., Del Teso, N., Perez, V. and Rodriguez-Cuesta, J. 2010. Clinical biochemistry parameters in C57BL/6J mice after blood collection from the submandibular vein and retroorbital plexus. Journal of American Association of Laboratory Animal Science. 49:2. 202-210.
  2. Joslin, O.T. 2009. Blood collection techniques in exotic small animals. Journal of Exotic Pet Medicine. 18:2. 117-139.
  3. Hem, A., Smith, A.J. and Solberg, P. 1998. Saphenous vein puncture for blood sampling of the mouse, rat, hamster, gerbil, guinea pig, ferret and mink. Laboratory Animals. 32. 364-368.
  4. Diehl, K-H., Hull, R., Morton, D., Pfister, R. Rabemampianina, Y., Smith, D., Vidal, J-M., and van de Vorstenbosch, C. 2001. A good practical guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21. 15-23.

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter