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血液撤退 II

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从小鼠和老鼠身上采集血液是广泛的科学研究所必需的, 研究人员已经开发出不同的方法来达到特定的实验目标。

在第一部分, 我们讨论了一般的血液撤退的考虑, 并回顾了复古眼眶眼出血, 尾剪和刻痕, 以及内血液收集方法。在这里, 我们将概述的程序, 从面部, 颌下腺, 隐, 股静脉采血。这些方法是较少侵入性的, 不需要麻醉, 这使得他们 methods-of-choice 时, 使用麻醉剂可能混淆血液结果或其他数据。

让我们从小鼠的面部血管中获取血样的过程开始。在鼠标上, 有一个容易接近的面部静脉贯穿脸颊。首先选择合适的设备进行操作。基本上, 你需要一个小型离心管血液收集和柳叶刀, 这是可用的不同大小。选择正确的柳叶刀取决于年龄, 性别, 和体重的动物和样本的大小要收集。有关柳叶刀选择的详细信息, 请参阅文本协议。

通过使用 scruffing 技术来限制动物的过程。适当的克制最大限度地减少头部侧向运动, 并有助于确保准确和安全的静脉穿刺与柳叶刀。如果抓地力太紧, 血流可能会受到限制, 导致收集的体积减少。一旦动物被限制, 通过测量眼侧眼角下方的眼睛长度和眼睛尾的宽度来定位脸部的大致面积。随着柳叶刀的尖端轻轻地感觉到下颚末端的点。为了更准确地刺穿容器, 您可能需要将鼠标置于其一侧。

现在, 在插入部位, 将柳叶刀垂直于皮肤表面, 尖端朝向鼻子微微。这是至关重要的, 因为如果柳叶刀尖端是定向尾, 耳道将被刺穿造成耳朵出血。穿刺的静脉, 应用坚定的推动和刺穿皮肤的柳叶刀的肩膀。一旦切除, 血液就会开始流动。为了协助水流, 将动物的头部置于低于心脏的位置。止血, 涂抹穿刺部位止血, 防止失血过多。最后, 释放对颈背的压力, 并把动物放回笼子里。请注意, 收集卷将有所不同, 但它是当务之急不超过最大数量的生存采血。参见血液撤退的文本协议一录影为详细关于推荐的最大容量收集。串行样本可以采取交替侧使用。任何一方都不应经常使用超过5-7 天。

现在让我们复习下颌下腺静脉出血的方法。虽然这是非常类似的技术, 为面部静脉出血, 有不同的设备和细微的差异, 在出血程序。

下下颌静脉沿着小鼠的下颚运行, 并与面部静脉会聚到颈静脉。这种方法不是用柳叶刀, 而是用针来进行的。但类似针, 针规的选择取决于年龄, 性别, 和动物的重量和样本大小-见文本协议的细节。

开始时, 将动物与脸部静脉出血的方式一样, 使头部的侧向运动最小。记忆过度紧抓可能会降低血液收集量。在抑制鼠标的同时, 想象一条线从嘴角的一角划过, 一条线从眼角的侧面眦。这些线的交点是下颌静脉的大致面积。这恰好与一个小的无毛酒窝发现尾的角落, 嘴角和略低于下颚线。

为了提高精确度, 将动物置于侧卧床 (3.6.1)。接下来, 把针垂直于皮肤的表面, 并插入一个坚定的推动。不要将针头插入斜面尖端, 因为插入深度大于可能导致头部、颈部和口腔内的肌肉、神经和其他血管受到创伤。除去针头后, 血液就会开始流动。像脸部静脉出血一样, 将小鼠的头部置于低于心脏的位置以协助血液流动。最后, 涂抹穿刺部位以达到止血和释放颈背上的压力, 使动物回到笼子。

现在, 让我们学习如何从隐静脉中采集血液。这是一个表面的血管, 运行背, 然后横向横跨跗关节。

你所需要的设备, 包括一个限制装置, 它可以是一个灵活的塑料大鼠或, 对小鼠一个修改50毫升塑料锥管可以使用。注意, 管端被切断, 以允许一个呼吸孔, 和一个半英寸宽和2英寸长的插槽是从盖帽结束。边缘被覆盖在血块胶带中, 以保护动物的安全。这个过程也需要一个止血带-制造使用3毫升注射器和长度0-2 吸收缝合, 三重抗生素软膏与棉签-被用作防潮屏障之间的皮肤和血滴, 理发钳, 22 计针用于静脉穿刺, 红细胞压积管采血。

要抑制一只老鼠, 先把它放进管子, 鼻子里。然后, 用食指和拇指轻轻引导后腿进入槽中并稳定它。随后, 从腿的侧面将头发从跗关节刮到窒息。然后, 涂抹一层薄薄的三重抗菌药膏到无毛区域。接下来, 尽量 cranially 止血带, 并将其拧紧。从膝部到踝关节的外表面上的隐血管将开始填充, 并将变得凸起, 并易于形象化。

接下来, 将22口径的针头直接放在血管上, 垂直于皮肤表面。并刺穿血管, 注意不要太深地插入针头, 并刺穿肌肉或骨骼。血液会在腿部的表面上起珠, 收集成红细胞压积管。一旦血液收集, 松开止血带, 并施加压力, 在穿刺止血。出血停止后, 将动物从束缚中取出, 并将其返回笼子。使用此方法收集的卷在10到150μ l 之间, 这取决于取样频率。和样品质量是可变的, 因为它可能包含组织产品。不超过4血液样本应采取在24小时内从同一条腿。

最后, 我们将学习如何从股静脉中采集血液, 这是在老鼠身上采集血液的另一个选择。股静脉从腹股沟到膝关节的内侧, 在横过膝和成为侧隐静脉之前, 使其容易接近。

股静脉出血的优点是较大的体积更容易收集比从隐静脉。缺点是, 这种程序, 在有意识的动物, 需要两个人。本程序所需的设备与隐静脉法相似, 但不需要止血带, 且优选的抑制装置为弹性锥。要选择正确的锥, 测量它与动物的身体长度, 然后使一个椭圆形的孔削减在水平的大腿。

要克制动物, 先把它放进管里, 鼻子里。然后, 折叠锥的结束, 并关闭它使用一个小的活页夹剪辑, 以防止动物退出。现在拉后腿通过椭圆形开放, 以获得对股静脉。不要抓得太紧, 因为它可能会加剧血肿的形成。其次, 从腹股沟到膝部, 将腿部的内表面剃掉, 并在无毛区域应用三层抗生素软膏。随后, 克制人应咬合股静脉, 并将小腿内面的大鼠抓向要抽血的人。将22口径的针垂直于血管, 直接刺穿静脉, 在红细胞压积管中收集血液, 因为它在皮肤表面上有珠子。穿刺应尽可能接近膝部, 以便将来在本网站前进行取样。同时, 确保穿刺深度不超过针锥的长度。为了帮助血液流动, 把大鼠的腿放在比心脏低的位置。最后, 释放腿部压力, 在穿刺部位施加压力, 以达到止血, 防止失血过多。请注意, 使用此过程可以收集大量的血液。

在讨论了血液收集技术的基本知识之后, 让我们来回顾一下为什么这些程序可能对科学研究有用的一些例子

血液经常被分析以确认疫苗开发过程中的免疫应答。在这里, 研究人员向患有膀胱癌的动物提供了一种多肽疫苗。其次, 他们通过下颌下腺采集血液并分离血清, 以检测不同细胞因子的水平, 这是疫苗有效性的指标。

通过研究人类疾病的生物标志物, 如糖尿病中的葡萄糖水平, 通常会进行血液采集以测试治疗的疗效。这些研究人员对通过尾静脉传递的糖尿病动物的新基因治疗的有效性有兴趣。在注射后, 这些研究人员从大隐静脉采集血液, 分析不同治疗方案对血糖水平的影响。

最后, 在一些实验中, 了解动物的基本状态是很重要的, 如炎症水平或压力。在这个例子中, 血浆是从一只老鼠在紧张事件之前和之后收集的。正如你所看到的, 皮质酮, 或压力荷尔蒙, 在有压力的事件发生十分钟后, 动物的水平更高。

你刚刚看了朱庇特的第二部分, 对小鼠和老鼠的血液提取技术。看完这两个视频后, 你应该更好地了解这些动物的血液收集的考虑和程序, 以及它们如何被用于今天的生物医学研究。一如既往, 感谢收看!

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