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血液回収 II

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さまざまな科学的研究のために必要なマウス、ラットの採血は、研究者は実験の特定の目標を達成するためにさまざまな方法を開発しました。

最初の割賦では、一般的な血液撤退検討を議論し、レトロ軌道眼出血、尻尾の切れ端とニックス、心臓内の血液のコレクション メソッドと見直し。ここでは、我々 は顔や顎下、伏在、大腿静脈からの採血の手順を概説します。これらのメソッドは、低侵襲で麻酔方法の選択をさせるときに麻酔薬の使用を混同するかもしれない血の結果またはその他のデータを必要としません。

マウス顔面静脈から血液サンプルを得るための手続きを始めましょう。マウス、頬全体を実行する簡単にアクセスできる顔面静脈があります。まずプロシージャの適切な機器を選択します。基本的には、採血用小型遠心分離機管にはさまざまなサイズで利用可能です 『 ランセット 』 が必要です。正しいランセットの選択は、年齢、性別、および動物の体重とサイズのサンプルを収集するのに依存しています。ランセットの選択の詳細についてはテキスト プロトコルを参照してください。

スクラッフィング テクニックを使用して動物を抑制することによって手順を開始します。適切な拘束は頭のサイド ・ ツー ・ サイド動きを最小限に抑えるし、ランセットの正確かつ安全な穿刺を確保する上で役立ちます。グリップがあまりにもタイトな血流が収集量を削減の結果を制限可能性があります。動物を拘束すると、一度尾側眼の下の目の長さと目の幅を測定することによって顔面静脈のおおよその領域を探します。『 ランセット 』 の先端で優しく顎骨が終了するポイントを感じる。血管を穿刺で精度を上げるためその側にマウスを配置する可能性があります。

今、挿入部位に保持ランセット皮膚表面に垂直な鼻に向かって少しヒントを。耳からの出血を引き起こす外耳道をピアス、ランセット先端が尾の方に向けられて場合、これは重要です。静脈を穿刺、事務所のプッシュを適用し、ランセットの肩まで皮膚を貫通します。除去する時に、血が流れ始めます。流れを支援するために頭の中心より低い動物を位置します。出血を止める止血し、過度の出血を防ぐため穿刺部位をしみ。最後に、首筋の圧力を解放し、そのケージに動物を返します。コレクションのボリュームによって異なりますが、生存の血のコレクションの最大音量を超えないように不可欠だ注意してください。コレクションの推奨される最大ボリュームの詳細については血の撤退 1 つのビデオのテキスト プロトコルを参照してください。利用する側を交互にシリアル採取することができます。どちらの側を 5-7 日間より多く使わなければなりません。

今顎下静脈ブリード方法を確認してみましょう。これは非常に顔面静脈出血する手法と似ていますが、機器の変動と出血の手順で微妙な違いがあります。

顎下の静脈はマウスの下顎に沿って実行され、顔面静脈と頚静脈に収束します。このメソッドではなく、ランセット針を使用してを実行しています。しかし、ランセットと同様に、針のゲージの選択は、年齢、性別、および動物の重量とサンプル サイズによって異なります - 詳細テキスト プロトコルを参照してください。

まず、首筋、顔と同じように動物静脈出血の頭の最小限のサイド ・ ツー ・ サイド動きがあるよう。思い出してください - 過度にタイトなグリップは、採血量を減らすかもしれない。マウスを抑制しながら顔と目の眼からのラインの間で、口の隅から線を想像してください。これらのラインの交点は、顎下の静脈のおおよその面積です。これは、あごのラインで若干上下口の隅に尾を見つけた小さな毛ディンプルと一致します。

精度を上げるためには、横臥床 (3.6.1) に動物を配置します。次に、針を皮膚の表面に垂直に保持し、強く押して挿入します。挿入深さ、筋肉、神経、頭、首、口腔内にある他の船舶にトラウマになる可能性がありますより大きいかさの先端を越えて針を挿入しないでください。針の除去、時に血が流れ始めます。顔面静脈出血のような頭の血流を支援する心臓より低いとマウスの位置します。最後に、止血を達成し、そのケージに動物を戻ります首筋の圧力を解放する穿刺部位をしみ。

今、大伏在静脈から血液を収集する方法を学びましょう。この静脈は背側を実行する表面的な容器そして横足根関節の間で。

この手順に必要な機器には、柔軟なプラスチック製のものラットや、50 ミリリットル プラスチック円錐形の異形管を使用することができますマウスとなる拘束デバイスが含まれています。呼吸孔を許可するように管の端が切り取られ、キャップの端から半インチ ワイドと 2 インチの長いスロットをカットに注意してください。エッジは、動物の安全のため血栓テープで覆われています。この手順も必要です止血帯 - 3 cc 注射器、0-2 の長さを使用して製造された非吸収性縫合糸、綿棒 ― 皮膚と血しぶき、バリカン、22 ゲージの防湿を証拠として使用することでトリプル抗生物質軟膏針、穿刺と採血ヘマトクリット管のため。

マウスを牽制するには、チューブへそれを置いて、まずは鼻。優しくスロットに後ろ足をガイドし、人差し指と親指を使ってそれを安定させます。その後、膝関節に飛節から脚の外側面から毛を剃る。次に、毛のない領域にトリプル抗生物質軟膏の非常に薄い層を汚れ。次に、可能な限り頭側として止血帯を適用、それを締めます。外側の表面の間で膝から足首まで実行している伏在容器埋めるために開始され、調達との視覚化を容易になります。

次に、皮膚の表面に血管と垂直真上 22 ゲージ針を保持します。血管を穿刺、筋肉や骨の針を深く挿入しないように注意して、穴をあけます。血液のヘマトクリット管にコレクションの脚の表面にビーズを。血液が集められると、止血帯を緩め、止血、穿刺の圧迫します。出血が停止した後、拘束から動物を削除し、そのケージに戻る。このメソッドで収集されたボリュームは、サンプリングの周波数に応じて、10 に 150 μ L の間です。で、サンプルの質が変数、組織の製品が含まれる場合があります。同じ脚から 24 時間以内は 4 血液サンプル以上を取られるべきではないです。

最後に、我々 はラットの血のコレクションの別のオプションは、大腿の静脈から血液を収集する方法を学びます。大腿静脈は脚の付け根から膝を渡ると横の大伏在静脈は、アクセスが容易になる前に膝関節に後ろ足の内側の側面に実行します。

大腿静脈から出血する利点は大伏在静脈より大きなボリュームをより簡単に収集します。欠点は、理性的な動物で、この手順が 2 人を必要とすることです。この手順に必要な機器は、止血帯を必要としない、望ましい拘束デバイスは柔軟なコーン大伏在静脈メソッドに似ています。正しいコーンを選択、動物の体の長さに対してそれを測定し、楕円形の穴に太もものレベルでカットします。

動物を牽制するには、チューブへそれを置いて、まずは鼻。コーンの端を折るし、動物が終了するを防ぐために小さなバインダー クリップを使用してそれを閉じます。今大腿静脈へのアクセスを得るために楕円形で後ろ足を引き出します。グリップが余りに堅く、それが血腫の形成を悪化させる可能性があります。次に、膝、脚の付け根から足の内側の表面を離れて剃るし、毛のない領域にトリプル抗生物質軟膏の薄層を適用します。その後、拘束人べきである大腿静脈を閉塞し、採血に行く人に直面して脚の内側の表面とラットを把握します。22 ゲージ針を血管に垂直に保持を直接静脈を穿刺し、それは皮膚の表面にビーズ、ヘマトクリット管に採血します。穿刺は、このサイトの前方今後サンプリングできるように可能な限り膝の近くにする必要があります。また、穿刺の深さは針の傾斜面の長さよりも深いことを確認します。血流を支援するためにラット心臓より下の脚の位置します。最後に、足の圧力を解放し、止血し、過度の出血を防ぐため穿刺部位に圧力を適用します。大幅血液の量を多くすることができますを収集することこの手順を使用して注意してください。

血液コレクション テクニックの基礎を議論した後確認してみましょうのいくつかの例これらの手順は、科学研究の役に立つかもしれません理由

血液はしばしばワクチン開発中に免疫応答を確認する分析されます。ここでは、研究者は、膀胱がんを患っている動物にペプチド ワクチンを配信しました。次に、彼らは顎下の静脈血を集め、ワクチンの有効性の指標となる別のサイトカインのレベルを検出する血清を分離します。

採血、血糖値糖尿病のようなひと疾患のバイオ マーカーを研究することによって、治療の有効性をテストするため行われることも。これらの研究者は糖尿病動物の尾静脈を介して配信する新規遺伝子療法の有効性をテストに興味があった。次の注入、これらの調査官は異なる治療プロトコルの血糖値に及ぼす影響を分析するいくつかの時点で大伏在静脈から採血。

最後に、いくつかの実験のため、炎症やストレスのレベルなど、動物の基本的な状態を把握することが重要です。この例では血漿は、ストレスの多いイベント前後にラットから採取しました。コルチコステロンやストレス ホルモン、見ることができるレベルが動物の上位の 10 分間、ストレスの多いイベントです。

マウスとラットの血液撤退技法にゼウスの 2 番目の割賦を見てきただけ。両方のこれらのビデオを見て後、は、考慮事項とこれらの動物、どのように彼らが使用される生物医学研究の今日からの採血の手順の理解を深める必要があります。いつも見てくれてありがとう!

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