Login processing...

JoVE Science Education
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content.

JoVE Science Education Lab Animal Research

Procedimientos de atención básica

Previous Video Next Video

Compound Administration II

Science Education (Lab Animal Research)

Compound Administration II

Anesthesia Induction and Maintenance

Science Education (Lab Animal Research)

Anesthesia Induction and Maintenance

Click here for the English version

Procedimientos de atención básica

Overview

Fuente: Kay Stewart, RVT, RLATG, CMAR; Valerie A. Schroeder, RVT, RLATG. Universidad de Notre Dame, en

Ratones y ratas son responsables de más del 90% de los animales usados para la investigación biomédica. El cuidado de estos animales de la investigación es fundamental para el resultado de experimentos. Existen procedimientos generales que se aplican a la mayoría de estos ratones y ratas, pero algunos de los animales, como los inmunodeprimidos, requieren pasos adicionales para sostener para la experimentación.

Utilizados ratones inmunocomprometidos incluyen aquellos que naturalmente se han producido en ratones consanguíneos y a los que se han creado por ingeniería genética. Los primeros ratones immunocompromised utilizados en la investigación fueron ratones "nude". El ratón BALB/c Nude (nu) fue descubierto en 1966, en una colonia de ratones BALB/c que estaba produciendo ratones que carecen de pelo y un timo. Estos ratones atímicos tienen un sistema inmunitario inhibido que carece de células T. El valor de este animal fue descubierto pronto para el uso en estudios de infecciones microbianas, inmunodeficiencias y autoinmunidad. Aunque no tan utilizados como el ratón desnudo, también es una rata desnuda. La rata desnuda T célula deficiente y poblaciones celulares agotadas en áreas timo-dependientes de los órganos linfoides periféricos. Otro ratón deficiente inmune natural es el ratón de inmunodeficiencia combinada severa (SCID). Estos ratones tienen un defecto que impide la producción de células B y T funcionales. Con la incapacidad para montar una respuesta inmune adecuada, estos ratones pueden servir como receptores de host para los trasplantes de células humanas. Varias cepas de ratón genéticamente modificado con deficiencias inmunes están comercialmente disponibles. ¹ La severidad de la deficiencia varía con la modificación genética; sin embargo, todos los immunocompromised ratones y ratas se manejan de manera similar.

Este manuscrito describe el cuidado de los animales inmunocompetentes e immunocompromised. Se discutirá la vivienda, dieta, requerimientos ambientales y manejo en ambos grupos de animales.

Principles

Vivienda/jaulas

Las ratas y ratones principalmente se alojan en jaulas tipo caja de zapatos con un fondo sólido que contiene material de la ropa de cama. La jaula del ratón típico shoebox proporciona 75 pulgadas cuadradas de superficie, que es adecuada para un máximo de cinco ratones adultos. Sin embargo, el diseño experimental puede llamar para grupos de cuatro ratones. En este caso, los ratones deben ser ubicados tras recibir en grupos de cuatro, para evitar la interrupción de los grupos sociales cuando comienza el experimento. En general, jaulas de rata permite un máximo de dos animales adultos adulto. Si las ratas están alojados a largo plazo, debe establecerse en la vivienda de la pareja.

Las jaulas pueden ser estáticas o ventilación individual (IVC). Jaulas estáticas están bien cubiertos con una tapa de la barra de alambre o se colocan en una bandeja debajo de un estante que es entonces la parte superior de la jaula. Material del filtro se agrega en la parte superior de la jaula como una tapa sobre la tapa de la barra de alambre, o como una hoja de papel de filtro sobre los estantes del estante. Cavas se configuran como un bonete que se colocan en un bastidor que proporciona flujo de aire en la caja, jaula y tapa de barra de alambre. El uso de cavas elimina la necesidad de cambiar la jaula como se cambian jaulas a menudo como estáticas.

Sistemas de jaula estándar proporcionan una fuente de agua y un área para la distribución de alimentos. Agua puede suministrarse a través de una botella de agua colocada en la parte superior de la jaula o a través de un tubo de sorber que es un componente de la jaula del animal. Cuando la jaula se dedica en un rack, el agua es transportada en el tubo de sorber de un sistema riego automático que está diseñado para satisfacer las necesidades de los animales en el Animalario. Jaulas deben estar preparados adecuadamente para proporcionar una atención adecuada para los animales. Hay cualquiera de los dos alimentadores colocados dentro de la jaula del animal, o una sección de la tapa de la barra de alambre se utiliza para almacenamiento de alimentos. Alimentos deben colocarse que no está sucia por los animales.

Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio²(la "Guía") afirma que todos los implementos jaulas deben limpiarse por lo menos cada 2 semanas. Algunas jaulas y accesorios pueden necesitar ser cambiado más a menudo dictada por el nivel de olor y amoníaco en el recinto. En general, los cavas están programados para cambiar cada dos semanas a menos que existan cuatro o más hombres o una hembra con una camada; los recintos pueden requerir cambio semanal. Como cambio de jaula, es una oportunidad para que los ratones expuestos a patógenos, cambio de las jaulas para ratones deficientes inmunes debe hacerse como infrecuentemente como sea posible.

Dieta

Hay muchas composiciones de las dietas con variaciones en los niveles de grasa, proteína y carbohidratos. Típicamente, los feeds deben conformados por 15-19% de proteína, carbohidratos 44% y 4-9% de grasa. Alimentos con un contenido de grasa mayor a menudo se utilizan para colonias de cría para mejorar la reproducción. Como los alimentos pueden ser una fuente de contaminación para los ratones immunocompromised, debe ser ya sea vapor esterilizado o irradiado. Alimento que se somete al proceso de autoclave debe ser formulado especialmente para soportar el proceso. Sin embargo, el proceso de irradiación no altera el contenido de alimentos.

El agua es otra fuente potencial de contaminación para los animales deficientes inmunes. Agua debe ser procesado a través de un autoclave o filtración que incluye el agua que pasa a través de un filtro UV. Al vapor esteriliza el agua en un autoclave, botellas individuales de agua están cubiertos con papel de aluminio. Tapitas con tubos de sorber se esterilizan por separado en una bolsa de autoclave. Acidificación del agua a un pH de 2.5-3 ayuda a controla los organismos bacterianos de crecimiento en las botellas de agua. Agua se acidifica agregando dos gotas de 12 mole (M) de ácido clorhídrico (HCl) a ocho litros de agua osmolalidad inversa (RO). Sistemas de riego automáticos se pueden utilizar con una serie de filtración a través del sistema que incluye filtros de partículas y un filtro de luz ultravioleta.

Medio ambiente

Las condiciones ambientales dentro de un centro de cuidado de los animales deben ser estrechamente controladas. Las pautas y las regulaciones federales han establecido los estándares para el cuidado y manejo de comúnmente utilizado animales. Iluminación, temperatura, humedad y caudal de aire vienen a satisfacer las necesidades fisiológicas de los animales. Con la excepción de la necesidad de una temperatura ligeramente mayor, los parámetros para los animales inmunodeprimidos son los mismos que para los animales convencionales. Los animales desnudo athymic también requieren camas adicionales y rallados materiales anidación de tipo de papel en sus jaulas para ayudar con la termorregulación.

Salas de animales deben ser mantenidos a una temperatura entre 68-72° F con un nivel de humedad de 40-60%. ² niveles de humedad por debajo del 40% pueden resultar en cola anillada de ratones y ratas, una condición que hace que la piel de la cola se seque hasta el punto de que demasiado apretado alrededor de la cola, que puede provocar el desprendimiento de la cola. Ciclos de iluminación debe ajustarse para evitar factores de estrés a los animales causados por fotoperíodos inadecuados o intensidad de la luz. Normalmente, los fotoperíodos son 12 horas y 12 horas apagado. La intensidad de iluminación debe variar según la actividad en la sala. Cuando los técnicos están trabajando en la sala de animales, mayores niveles de iluminación se pueden utilizar. Sin embargo, la iluminación debe reducirse a aproximadamente 325 lux concluido toda actividad. ² las luces deben estar en contadores de tiempo y los ciclos verificados a través de sistemas de monitoreo. Como se indica en la guía, habitaciones animal deben tener un mínimo de 10-15 cambios de aire de 100% aire fresco por hora. ² cambios de aire disminución de microbios y los olores en la sala de animales. En las salas de animales densamente pobladas, el número de cambios de aire por hora deba aumentarse.

Factores ambientales en el nivel de la jaula incluyen el tipo de jaulas, el sustrato utilizado dentro de la jaula, el sistema de suministro de agua y la dieta. Vivienda social es obligatorio a menos que justifique científicamente, o un animal no es compatible con todos los demás. Las disposiciones de enriquecimiento ambiental, tales como chozas de papel y materiales de anidación, permiten los animales exhiben comportamientos propios de cada especie, que a su vez disminuye el nivel de estrés y aumenta el bienestar general de los animales. Materiales de anidación también proporcionan una zona de dormitorio que está saturada en calmar las feromonas que ayuda con el alojamiento de múltiples ratones machos en la misma jaula. El área de nidificación se traslada a la jaula limpia a cambiar para ayudar a prevenir la agresión en los varones como se introducen en un nuevo entorno de la jaula. ³

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Procedure

1. manejo de ratones inmunocompetentes de (convencionales)

Se ha demostrado que los trastornos del sistema inmune de los ratones son muy similares a los de los seres humanos. ² como estos animales tienen una limitada capacidad inmunológica, procedimientos en el manejo y cuidado de estos animales han sido diseñados para minimizar el riesgo de enfermedades infecciosas mediante el uso de controles de ingeniería, equipo de protección personal para la personal de cuidado de los animales y procedimientos de operación; Estos mitigan contaminación de jaulas y otros equipos con los cuales los animales están en contacto.

Desembalaje de contenedores: recibir animales de otras instituciones o proveedores de animales supone un riesgo para los animales ya ubicados dentro de las instalaciones animales. Durante el transporte, las cajas de transporte de los animales pueden entrar en contacto con agentes patógenos. Por lo tanto, debe realizarse el procedimiento adecuado al desempacar los contenedores de envío.
1. Requerimientos mínimos de equipo de Protección Personal (PPE) son guantes, bata de laboratorio limpia o peelings, particulado máscara y gafas de seguridad al manipular los animales.
2. Seleccionar la caja adecuada, incluyendo la tapa de la barra de alambre y la parte superior de la barrera. La jaula debe ser equipada con ropa de cama adecuada y materiales de anidación. Jaulas todos deben ser preparado y colocado en la zona de recepción antes de la llegada de los animales.
3. A su llegada, las cajas de transporte se colocan en una segura y sala de temperatura controlada. A continuación, examinar el contenedor de daños.
4. Desinfectar las superficies exteriores del contenedor con un producto dióxido de colina para destruir cualquier patógeno dañoso. Asegúrese de que el desinfectante esté en contacto con la caja de acuerdo con las recomendaciones del fabricante, generalmente 15-30 minutos.
5. Coloque el recipiente en una estación de transferencia Animal (ATS). ATS proporciona flujo de aire filtrado por HEPA dentro de la campana que proporciona protección contra alérgenos creando una barrera de aire de vacío entre el usuario y la zona de trabajo. Esto garantiza la mínima exposición al pelo/caspa de animales y material del lecho de la jaula. El aire unidireccional también protege a los animales desde el aire ambiente, minimizando la posibilidad de contaminación.
6. Una vez abierto el contenedor, evaluar la salud general de los animales. Tome nota de los animales heridos o enfermos.
7. Colocar los animales en las jaulas en los tamaños de grupo adecuada. La agrupación debe ser de acuerdo a las normas de espacio y el protocolo experimental que se asignará.
8. Cubrir la jaula con la tapa de la barra de alambre. Fije el divisor en la tapa de la barra de alambre para crear dos zonas en la tapa.
9. Seleccionar los alimentos adecuados y coloque los alimentos en un lado de la tapa de la barra de alambre. Deje el segundo lado abierto para permitir mejor circulación del aire.
10. Se proporcionará agua a través de botellas de agua o un sistema de riego automático. Botellas de agua se utilizan para los ratones recién destetados para que sean capaces de mantener sus niveles de hidratación. Para IVC jaulas con riego automático, cargue el tubo de riego antes de colocarlas sobre la parrilla.
11. Coloque la jaula en un estante. Si cavas, compruebe que la jaula esté completamente encajada en la bandeja y el tubo de sorber está asegurado al sistema de riego a utilizar.
Jaula de ratones convencionales de cambio
1. Jaulas animales se cambian en un ATS. El ATS es desinfectado al final de cada sesión.
2. Sólo una jaula puede abrirse en un momento.
3. Jaulas preparadas con la ropa de cama adecuada y materiales de anidación se trajeron en la sala de animales. Un pequeño número de jaulas se coloca en el ATS.
4. Jaulas IVC con tubos internos sorber deben cargarse a la fuerza el agua en el sorber para eliminar el espacio muerto de aire en el tubo de sorber. Si no está correctamente cargado, los ratones no pueden ser capaces de proporcionar suficiente presión en el tubo de sorber para extraer el aire.
5. Requerimientos mínimos de equipo de Protección Personal (PPE) son guantes, bata de laboratorio limpia o peelings, particulado máscara y gafas de seguridad al manipular los animales.
6. Una jaula de animales a cambiarse se coloca en una jaula nueva y luego en el ATS.
7. Animales son transferidos ya sea a mano o con la utilización de un fórceps de acolchado. Guantes o se cambian entre jaulas o entre grupos de ratones. Guantes también se pueden desinfectar con un no tóxico químico entre jaulas.
8. Se ha demostrado que transferir el área de nidificación de los ratones en una jaula limpia ayuda en la transición hacia la jaula limpia, especialmente para varones ubicado en grupo. Otros artículos de enriquecimiento también se transfieren a la jaula de nuevo.
9. Una vez que la parte superior de la jaula o el alimentador se coloca en la jaula de nuevo, se agregan los alimentos.
10. La parte superior de la barrera se coloca en la nueva jaula y la jaula se vuelve a la parrilla.
11. Jaulas IVC deben acoplar correctamente en el bastidor para asegurar que las válvulas de aire y el agua estén en contacto.

2. manejo ratones inmunodeprimidos

Desembalaje de contenedores
1. Animales inmunodeprimidos deben ser desempaquetados en condiciones estériles. Todos los individuos inmunes ratones deficientes de manejo deben usar una bata esterilizada de vapor, mascarilla, gorro de pelo y guantes estériles. Debe utilizarse una técnica aséptica en todo momento dar cuando estos animales.
2. Todos los equipos y jaulas deben han sido esterilizados por vapor, radiación ultravioleta, o químicamente esterilizado con un remojo en etanol al 70% durante al menos 30 minutos hay dos opciones para jaulas estériles: estándar jaulas que ha sido envuelta y vapor esterilizado o jaulas que es esterilizado-generalmente a través de irradiación-por parte del vendedor. Estas jaulas son un uso, unidades desechables.
3. Antes de manipular ratones debajo de la campana de flujo laminar, la campana se rocía con etanol al 70% con el ventilador funcionando. El ventilador de la campana debe permanecer en todo momento para mantener el ambiente estéril. Después de cada uso, la campana es rociada con un desinfectante y borrada de todos los desechos y pulveriza otra vez con etanol al 70%.
4. Óptimo, dos personas se requieren para la adecuada recepción de los ratones immunocompromised: uno para manejar los animales usando técnicas asépticas (el técnico estéril) y que se encargará de artículos contaminados (el técnico no estéril). La persona no estéril aún debe usar un vestido limpio, manga larga; bata de laboratorio o delantal; máscara; Bonnet; y guantes estériles para evitar la contaminación del interior estéril necesario llegar a la campana.
5. Preparar una campana de flujo laminar como se describió anteriormente. Es preferible tener una capilla dedicada a animales inmunocomprometidos. Se recomienda que la capucha se equipado con luz ultravioleta de la esterilización (UV) que puede utilizarse para esterilizar el interior de la campana entre usos. Un temporizador se utiliza para asegurar que la superficie de la campana tiene suficiente exposición a los rayos UV.
6. El exterior de todos los que se colocan en la campana son rociados con alcohol al 70%, incluyendo el embalaje exterior de alimentos, agua y jaulas.
7. Contenedores son rociados con una solución de dióxido de cloro antes de que se colocan en la campana. Una vez colocado en la campana, continúan sin abrir durante 15-30 minutos.
8. El designado controlador animal abre la comida estéril y agua debajo de la capilla.
9. El técnico no estéril abre el cuadro de envío bajo el capó. El técnico no estéril debe tenerse cuidado para evitar el contacto con las superficies interiores de la campana y el interior de la caja de envío.
10. El controlador de animales abre la jaula estéril y prepara la jaula colocando comida y agua en la parte superior de la jaula. Los ratones son entonces extraídos de la caja de envío y colocados en la jaula estéril.
11. Condición animal es observado por el controlador animal estéril. Se segregan los animales que aparecen enfermos o tienen lesiones evidentes. Jaulas todo marcado con animales que requieren atención veterinaria se colocará para el manejo, la jaula manipulación cambiante o experimental, para reducir la posible contaminación de otros animales.
12. La persona no estéril Quite la jaula del poblado de la campana. Jaulas se pueden colocar en un rack estándar como jaulas estáticas, o en un estante ventilado como cavas. En los cavas, los ratones deben proporcionarse con materiales de anidación adicionales para ayudar en la regulación térmica.
13. El controlador de animal debe cambiar guantes después de cada contenedor para evitar la posible contaminación cruzada de los grupos de animales. El envío número de contenedor se registra en la tarjeta de la jaula para rastrear el origen de los animales en caso de enfermedad.
14. Suministros no utilizados pueden guardarse para uso futuro siempre que el envase original puede ser resellado. Alimentos no utilizados se retira de la habitación.
15. Ratones deben experimentar un período de aclimatación de mínimo una semana antes de su uso experimental.
Jaula para ratones inmunodeprimidos
1. Las jaulas de ratón se cambian al menos una vez semanalmente o más a menudo si se considera necesario.
2. Pasos para la preparación de la campana, la preparación de la jaula y personal PPE son los mismos en cuanto a la descompresión de los animales.
3. Animales se transfieren ya sea a mano o con el uso de fórceps acolchado. El controlador animal designado debe reglove después de cada 5-10 jaulas, si los guantes son rasgados o contaminados, o si un animal que aparece enfermo.
4. Cualquier jaulas con los animales que aparecen enfermos se colocará en el extremo de la caja de cambio de orden, para evitar la posible exposición de los animales sanos a patógenos o contaminantes.
5. Si los alimentos o agua debe añadirse a la jaula antes del próximo cambio de jaula programada, debe hacerse asépticamente bajo el capó preparado.

Ya que las ratas y ratones son responsables de más del noventa por ciento de los animales utilizados para la investigación biomédica, tomando el cuidado estos organismos adecuado es fundamental para el resultado de los experimentos. Estos procedimientos de atención comienzan a la derecha en el comienzo con desembalar animales en contenedores, a los cambios de jaula, para mantener las condiciones de vivienda adecuadas, proporcionar la dieta apropiada y garantizar el ambiente adecuado. Aunque existen procedimientos generales que se aplican a la mayoría de los ratones y ratas en el laboratorio, algunos animales, como los que son immunocompromised, requieren atención adicional para sostener para los propósitos experimentales.

Este video describe las normas y procedimientos de atención esencial para los animales inmunocompetentes e immunocompromised. Y por último, ilustramos algunos experimentos de ejemplo que muestra cómo los científicos utilizan este conocimiento para propósitos de investigación diferentes.

Recibir animales de otras instituciones representa un riesgo para los animales ya ubicados dentro de las instalaciones, como durante el transporte, las cajas de transporte pueden entrar en contacto con agentes patógenos. Por lo tanto, debe emplearse un procedimiento adecuado cuando desembale los contenedores de envío.

Antes de manipular cualquier animal, es importante usar el equipo de Protección Personal o EPP. El PPE mínimo a usar es una bata de laboratorio, guantes, gafas y una mascarilla de tipo quirúrgico que reduzca la exposición a polvo y alérgenos. El siguiente paso es seleccionar jaulas adecuadas para los animales entrantes. A continuación, equipar la jaula con ropa de cama adecuada y materiales de anidación. Y las jaulas preparadas para la sala de recepción con control de temperatura, para que estén listos para la transferencia antes de la llegada de los animales.

A la llegada del envío, coloque las cajas de transporte en un lugar seguro en la sala de recepción. Examinar el contenedor de daños y desinfectar las superficies exteriores para destruir cualquier patógeno dañoso. Asegúrese de que el desinfectante esté en contacto con la caja de al menos 15-30 minutos, según las recomendaciones del fabricante. Luego, coloque el recipiente en la estación de transferencia de animales, o ATS. Esta estación ofrece aire particulado de alta eficiencia, o HEPA, filtrado flujo unidireccional dentro de la campana. HEPA protege al usuario de los alérgenos y protege a los animales desde el aire ambiente, minimizando la posibilidad de contaminación. A continuación, abra el contenedor y evaluar la salud general de los roedores. Tome nota de cualquier animal que parece enfermo o lesionado. Después de eso, colocarlos en la jaula ya montada en los tamaños de grupo apropiado, cubrir la jaula con la tapa de la barra de alambre y asegurar el divisor para crear dos zonas. Seleccionar los alimentos adecuados y colocar en un lado y dejar el segundo lado abierto para permitir mejor circulación del aire. Por último, si los animales no se colocan en una parrilla con riego automático, añadir una botella de agua para asegurar el adecuado suministro de agua. Recuerde, que el ATS debe ser desinfectado al final de cada sesión, y el ventilador debe ser de desinfección.

Para el cambio de jaula, coloque los dos jaulas, una jaula fresco con el material de la ropa de cama adecuada y la jaula usada con los animales en el ATS. Uno puede transferir los animales de la jaula vieja a la nueva jaula a mano o con la utilización de un fórceps de acolchado. Ambos estos métodos se han discutido en otro video de esta colección. Recuerde sólo una jaula de animales se puede abrir en un momento. Para ratones machos o hembras con una camada, se ha demostrado que transferir el área de nidificación de los ratones en la jaula limpia ayuda a los animales con la transición. Una vez que la parte superior de la jaula se coloca en la jaula nueva, transfiera los alimentos de la parte superior de la jaula vieja a la nueva parte superior y agregar más alimentos si es necesario. A continuación, coloque la parte superior de la barrera y volver a la jaula a la parrilla. Es una buena práctica cambiar guantes entre jaulas o entre grupos.

El procedimiento de desembalaje para animales inmunocomprometidos es un poco diferente, como las cosas deben ser estériles. Se recomendó que el ventilador interior de la campana por lo menos 24 horas antes de su uso. Como para los animales de immunocompenent, a la llegada del envío aerosol el contenedor con una solución desinfectante en la sala de recepción y dejarlo sin abrir durante 15-30 minutos. En la ATS designada para ratones immunocompromised, rocíe la campana de flujo laminar con etanol al 70% 30 minutos antes de la manipulación de animales. Es ideal para dos personas participan en esta actividad Desembalaje--una persona sería el técnico estéril usando la bata esterilizada de vapor y doble par de guantes estériles para manejar los animales usando técnicas asépticas y la otra sería no estéril técnico vestida con una bata de aislamiento limpio y un par de guantes para manejar artículos contaminados. Ambos deben llevar una, máscara, tapa de la pelo y gafas de seguridad.

Antes de abrir la caja de envío dentro de la campana, colocar todos los suministros y jaulas en estos y su exterior del aerosol con alcohol. Y a la llegada del envío, ponga la caja animal recibida en la campana y lo rocía con etanol al 70% también. Hay dos opciones para jaulas estériles, o jaulas estándar que ha sido envuelta y vapor unidades esterilizadas o desechables que ha sido esterilizado mediante radiación por parte del vendedor.

Iniciar el proceso de desembalaje abriendo el alimento estéril, seguido por la apertura de la caja de transporte. En este punto, el controlador debe desechar el primer par de guantes estériles. A continuación, la persona no estéril desenvuelve la jaula estéril y asépticamente pasa al controlador de animales que luego elimina el capó y la tapa de la barra de alambre y coloca boca abajo en la campana. Posteriormente, el tubo de sorber en la jaula se llena de agua en la estación ubicada en la capilla. Por último, el controlador animal coloca el animal en la jaula, asegura con la tapa de la barra de alambre, agrega alimentos y establece la capucha en su lugar. Tenga en cuenta que el ventilador de la campana debe permanecer en todo momento para mantener el ambiente estéril. Al final, la persona no estéril elimina la jaula del poblado de la campana y lo coloca en un bastidor adecuado. Para evitar la posible contaminación cruzada entre los grupos, el controlador de animal debe cambiar guantes después de cada contenedor.

Para el cambio de la jaula de los animales inmunocomprometidos, la preparación de la campana y jaulas y EPI son las mismas en cuanto a la descompresión de estos animales. Y la técnica de transferencia es igual como los animales inmunocompetentes, pero en condiciones estériles.

Ahora vamos a discutir las condiciones de vivienda adecuadas para los animales, que es otro aspecto importante de brindar cuidados esenciales. Ratones y ratas se alojan principalmente en caja de zapatos tipo jaula con un fondo sólido que contiene material de la ropa de cama. La jaula del ratón típico proporciona 75 pulgadas cuadradas de superficie, que es adecuada para un máximo de 5 ratones adultos. Por otro lado, una jaula de la rata tiene el área de 142 pulgadas cuadradas y es adecuada para 2 ratas adultas. Jaulas estáticas generalmente están cubiertos con una tapa de la barra de alambre y material de filtro se añade en la parte superior de la jaula como un capo. Individualmente ventiladas jaulas o cavas, también tienen una tapa de barra de alambre y la tapa, pero se colocan en un bastidor que proporciona flujo de aire en la caja. Esto elimina la necesidad de cambiar la jaula tan a menudo como jaulas estáticas, que pueden ser beneficiosos para los animales inmunocomprometidos.

Todos los sistemas de jaulas tienen una disposición para la alimentación y suministro de agua. Hay cualquiera de los dos alimentadores colocados dentro de la jaula o una sección de la tapa de la barra de alambre se utiliza para almacenamiento de alimentos. Alimentos deben colocarse que no está sucia por los animales. Generalmente el agua se suministra a través de una botella de agua colocada en la parte superior de la jaula, o a través de una válvula automática de riego potable está construida de una componente de la jaula del animal. Para beber opción de válvula, cuando la jaula se dedica en un rack, el agua es transportada en el tubo de un sistema riego automático que está diseñado para satisfacer las necesidades de los animales en el Animalario.

La Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio establece que todos los implementos jaulas deben limpiarse por lo menos cada 2 semanas. Algunas jaulas y accesorios pueden necesitar ser cambiado más a menudo dictada por el nivel de olor y amoníaco en el recinto.

Ahora vamos a hablar de comida adecuada y agua para los animales inmunocompetentes e immunocompromised. Hay muchos alimentos disponibles en el mercado con la variable proteína, carbohidrato y grasa composiciones. Idealmente, deberían abarcar los feeds 15-19% de proteína, carbohidratos 44% y 4-9% de grasa. Animales inmunodeprimidos, asegúrese de que la alimentación ha sido esterilizada.

Agua del grifo, u ósmosis reversa que es agua RO, se pueden utilizar para animales inmunocompetentes, pero para los animales inmunodeficientes, el agua puede ser una fuente de contaminación y por lo tanto necesita ser esterilizado. Esterilidad en el agua se mantiene mediante la adición de 2 gotas de Acido molar 12 a 8 litros de agua del RO, que se acidifica el agua a un pH de 2.5-3 y el límite de crecimiento bacteriano. Luego Vierta el agua en botellas individuales y cubrir con papel de aluminio. Colocar las tapas de botella con tubos de sorber por separado en una bolsa de autoclave y ponerlo todo en un autoclave para esterilización por vapor.

Ahora vamos a discutir las condiciones ambientales estándar esenciales para el cuidado de los animales.

En el nivel de la jaula, vivienda social es obligatoria a menos que justifique científicamente o si un animal es incompatible con todos los demás. Enriquecer el ambiente con chozas de papel y materiales de anidación permiten los animales exhiben comportamientos específicos como nido edificio y cavadores, que a su vez disminuye el nivel de estrés y aumenta el bienestar general de los animales. Materiales de anidación también proporcionan una zona de dormitorio que está saturada en calmar las feromonas que ayuda con el alojamiento de múltiples ratones machos en la misma jaula. Como se mencionó anteriormente, hacia el área de nidificación de la jaula limpia a cambio de jaula ayuda a prevenir agresiones, especialmente en varones, como los animales son introducidos en un nuevo entorno. Para animales desnudo athymic, uno debe considerar proveer camas adicionales y deshebrada tipo papel anidando materiales en sus jaulas para ayudar con la termorregulación.

En el plano de la habitación, la temperatura para ratones y ratas debe ser entre 68 y 79 ° f el. El nivel de humedad de la habitación debe ser 30-70%, como niveles más bajos pueden resultar en una condición conocida como gato de cola anillada. El tercer parámetro de la habitación es la iluminación. Esto incluye la intensidad de la luz y los ciclos. Normalmente, la sala de animales se establece en 12 horas luz/12 horas ciclo oscuro. La intensidad de iluminación debe variar según la actividad en la sala. Cuando están trabajando técnicos, permite mayores niveles de iluminación. Sin embargo, se debe reducirse a aproximadamente 325 lux concluido toda actividad. Por último, el flujo de aire dentro de la habitación debe también ser controlado cuidadosamente. Un mínimo de 10-15 cambios de aire de 100% aire fresco debe ocurrir cada hora. Esto disminuye los microbios y los olores en la sala de animales.

Por último, vamos a ver cómo los investigadores están usando este conocimiento sobre los animales de laboratorio, vivienda, alimentación y medio ambiente preferencias en sus experimentos.

Como comentamos anteriormente, animales de laboratorio generalmente exhiben comportamiento de nidificación, que reduce el estrés, y los investigadores han utilizado esto como un indicador del bienestar de los animales. En este particular experimento, los científicos desarrollaron un imparcial sistema para anotar el nido construido y utilizado luego estudio el efecto de la temperatura ambiente en el comportamiento de nidificación. Como se puede ver, un aumento de temperatura había causado una significativa caída en el marcador, destacando el papel de la temperatura en bienestar animal circundante.

Dado que las ratas y ratones amor hidratos de carbono, los investigadores han utilizado piensos de diferentes formas para probar la función motora de los animales. Esto incluye análisis de destreza durante diferentes tipos de tareas de manipulación de alimentos y examinando comportamiento alcanzando tras intervención quirúrgica o farmacológica.

Por último, se sabe que las ratas y ratones son nocturnas y no prefieren zonas iluminada. Los científicos utilizan este conocimiento para la construcción de ambiente para el estudio de la ansiedad en estas especies. Por ejemplo, aquí las investigaciones introducen animales en campo abierto simple y estudiaron el tiempo empleado por el tipo salvaje y ratones knockout en el interior y exterior presentaron zonas, para analizar la caída de gen de efecto sobre la ansiedad-como comportamiento.

Sólo ha visto la introducción de Zeus a los procedimientos de atención esencial para ratones y ratas. Ahora debería tener una mejor comprensión de las medidas se deben tomar para asegurar que el medio ambiente y el manejo de estos animales no causa ningún daño a la salud del animal y usted debe también saber cómo los investigadores pueden modificar estos parámetros para conseguir diferentes objetivos científicos. ¡Como siempre, gracias por ver!

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Applications and Summary

El cuidado y manejo de los animales utilizados en investigación biomédica es crucial para el resultado de los experimentos. Normas y pautas establecidas determinan muchas de las prácticas utilizadas. Sin embargo, las medidas adicionales se requieren para ratones y ratas que tienen inmunodeficiencias para mitigar la exposición accidental a patógenos oportunistas. Cuando prácticas se adhieren a los procedimientos establecidos, la salud y bienestar de los animales experimentales es mayor, y resultó mejor experimental se logró.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

Belizário J.E. 2009. Immunodeficient Mouse Models: An Overview. The Open Immunology Journal. 2. 79-85.
Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.
Van Loo, P. 2001. Modulation of aggression in male mice: influence of cage cleaning regime and scent marks. In Male Management: Coping with Aggression Problems in Male Laboratory Mice. Surrey: UK.

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Ya que las ratas y ratones son responsables de más del noventa por ciento de los animales utilizados para la investigación biomédica, tomando el cuidado estos organismos adecuado es fundamental para el resultado de los experimentos. Estos procedimientos de atención comienzan a la derecha en el comienzo con desembalar animales en contenedores, a los cambios de jaula, para mantener las condiciones de vivienda adecuadas, proporcionar la dieta apropiada y garantizar el ambiente adecuado. Aunque existen procedimientos generales que se aplican a la mayoría de los ratones y ratas en el laboratorio, algunos animales, como los que son immunocompromised, requieren atención adicional para sostener para los propósitos experimentales.

Este video describe las normas y procedimientos de atención esencial para los animales inmunocompetentes e immunocompromised. Y por último, ilustramos algunos experimentos de ejemplo que muestra cómo los científicos utilizan este conocimiento para propósitos de investigación diferentes.

Recibir animales de otras instituciones representa un riesgo para los animales ya ubicados dentro de las instalaciones, como durante el transporte, las cajas de transporte pueden entrar en contacto con agentes patógenos. Por lo tanto, debe emplearse un procedimiento adecuado cuando desembale los contenedores de envío.

Antes de manipular cualquier animal, es importante usar el equipo de Protección Personal o EPP. El PPE mínimo a usar es una bata de laboratorio, guantes, gafas y una mascarilla de tipo quirúrgico que reduzca la exposición a polvo y alérgenos. El siguiente paso es seleccionar jaulas adecuadas para los animales entrantes. A continuación, equipar la jaula con ropa de cama adecuada y materiales de anidación. Y las jaulas preparadas para la sala de recepción con control de temperatura, para que estén listos para la transferencia antes de la llegada de los animales.

A la llegada del envío, coloque las cajas de transporte en un lugar seguro en la sala de recepción. Examinar el contenedor de daños y desinfectar las superficies exteriores para destruir cualquier patógeno dañoso. Asegúrese de que el desinfectante esté en contacto con la caja de al menos 15-30 minutos, según las recomendaciones del fabricante. Luego, coloque el recipiente en la estación de transferencia de animales, o ATS. Esta estación ofrece aire particulado de alta eficiencia, o HEPA, filtrado flujo unidireccional dentro de la campana. HEPA protege al usuario de los alérgenos y protege a los animales desde el aire ambiente, minimizando la posibilidad de contaminación. A continuación, abra el contenedor y evaluar la salud general de los roedores. Tome nota de cualquier animal que parece enfermo o lesionado. Después de eso, colocarlos en la jaula ya montada en los tamaños de grupo apropiado, cubrir la jaula con la tapa de la barra de alambre y asegurar el divisor para crear dos zonas. Seleccionar los alimentos adecuados y colocar en un lado y dejar el segundo lado abierto para permitir mejor circulación del aire. Por último, si los animales no se colocan en una parrilla con riego automático, añadir una botella de agua para asegurar el adecuado suministro de agua. Recuerde, que el ATS debe ser desinfectado al final de cada sesión, y el ventilador debe ser de desinfección.

Para el cambio de jaula, coloque los dos jaulas, una jaula fresco con el material de la ropa de cama adecuada y la jaula usada con los animales en el ATS. Uno puede transferir los animales de la jaula vieja a la nueva jaula a mano o con la utilización de un fórceps de acolchado. Ambos estos métodos se han discutido en otro video de esta colección. Recuerde sólo una jaula de animales se puede abrir en un momento. Para ratones machos o hembras con una camada, se ha demostrado que transferir el área de nidificación de los ratones en la jaula limpia ayuda a los animales con la transición. Una vez que la parte superior de la jaula se coloca en la jaula nueva, transfiera los alimentos de la parte superior de la jaula vieja a la nueva parte superior y agregar más alimentos si es necesario. A continuación, coloque la parte superior de la barrera y volver a la jaula a la parrilla. Es una buena práctica cambiar guantes entre jaulas o entre grupos.

El procedimiento de desembalaje para animales inmunocomprometidos es un poco diferente, como las cosas deben ser estériles. Se recomendó que el ventilador interior de la campana por lo menos 24 horas antes de su uso. Como para los animales de immunocompenent, a la llegada del envío aerosol el contenedor con una solución desinfectante en la sala de recepción y dejarlo sin abrir durante 15-30 minutos. En la ATS designada para ratones immunocompromised, rocíe la campana de flujo laminar con etanol al 70% 30 minutos antes de la manipulación de animales. Es ideal para dos personas participan en esta actividad Desembalaje--una persona sería el técnico estéril usando la bata esterilizada de vapor y doble par de guantes estériles para manejar los animales usando técnicas asépticas y la otra sería no estéril técnico vestida con una bata de aislamiento limpio y un par de guantes para manejar artículos contaminados. Ambos deben llevar una, máscara, tapa de la pelo y gafas de seguridad.

Antes de abrir la caja de envío dentro de la campana, colocar todos los suministros y jaulas en estos y su exterior del aerosol con alcohol. Y a la llegada del envío, ponga la caja animal recibida en la campana y lo rocía con etanol al 70% también. Hay dos opciones para jaulas estériles, o jaulas estándar que ha sido envuelta y vapor unidades esterilizadas o desechables que ha sido esterilizado mediante radiación por parte del vendedor.

Iniciar el proceso de desembalaje abriendo el alimento estéril, seguido por la apertura de la caja de transporte. En este punto, el controlador debe desechar el primer par de guantes estériles. A continuación, la persona no estéril desenvuelve la jaula estéril y asépticamente pasa al controlador de animales que luego elimina el capó y la tapa de la barra de alambre y coloca boca abajo en la campana. Posteriormente, el tubo de sorber en la jaula se llena de agua en la estación ubicada en la capilla. Por último, el controlador animal coloca el animal en la jaula, asegura con la tapa de la barra de alambre, agrega alimentos y establece la capucha en su lugar. Tenga en cuenta que el ventilador de la campana debe permanecer en todo momento para mantener el ambiente estéril. Al final, la persona no estéril elimina la jaula del poblado de la campana y lo coloca en un bastidor adecuado. Para evitar la posible contaminación cruzada entre los grupos, el controlador de animal debe cambiar guantes después de cada contenedor.

Para el cambio de la jaula de los animales inmunocomprometidos, la preparación de la campana y jaulas y EPI son las mismas en cuanto a la descompresión de estos animales. Y la técnica de transferencia es igual como los animales inmunocompetentes, pero en condiciones estériles.

Ahora vamos a discutir las condiciones de vivienda adecuadas para los animales, que es otro aspecto importante de brindar cuidados esenciales. Ratones y ratas se alojan principalmente en caja de zapatos tipo jaula con un fondo sólido que contiene material de la ropa de cama. La jaula del ratón típico proporciona 75 pulgadas cuadradas de superficie, que es adecuada para un máximo de 5 ratones adultos. Por otro lado, una jaula de la rata tiene el área de 142 pulgadas cuadradas y es adecuada para 2 ratas adultas. Jaulas estáticas generalmente están cubiertos con una tapa de la barra de alambre y material de filtro se añade en la parte superior de la jaula como un capo. Individualmente ventiladas jaulas o cavas, también tienen una tapa de barra de alambre y la tapa, pero se colocan en un bastidor que proporciona flujo de aire en la caja. Esto elimina la necesidad de cambiar la jaula tan a menudo como jaulas estáticas, que pueden ser beneficiosos para los animales inmunocomprometidos.

Todos los sistemas de jaulas tienen una disposición para la alimentación y suministro de agua. Hay cualquiera de los dos alimentadores colocados dentro de la jaula o una sección de la tapa de la barra de alambre se utiliza para almacenamiento de alimentos. Alimentos deben colocarse que no está sucia por los animales. Generalmente el agua se suministra a través de una botella de agua colocada en la parte superior de la jaula, o a través de una válvula automática de riego potable está construida de una componente de la jaula del animal. Para beber opción de válvula, cuando la jaula se dedica en un rack, el agua es transportada en el tubo de un sistema riego automático que está diseñado para satisfacer las necesidades de los animales en el Animalario.

La Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio establece que todos los implementos jaulas deben limpiarse por lo menos cada 2 semanas. Algunas jaulas y accesorios pueden necesitar ser cambiado más a menudo dictada por el nivel de olor y amoníaco en el recinto.

Ahora vamos a hablar de comida adecuada y agua para los animales inmunocompetentes e immunocompromised. Hay muchos alimentos disponibles en el mercado con la variable proteína, carbohidrato y grasa composiciones. Idealmente, deberían abarcar los feeds 15-19% de proteína, carbohidratos 44% y 4-9% de grasa. Animales inmunodeprimidos, asegúrese de que la alimentación ha sido esterilizada.

Agua del grifo, u ósmosis reversa que es agua RO, se pueden utilizar para animales inmunocompetentes, pero para los animales inmunodeficientes, el agua puede ser una fuente de contaminación y por lo tanto necesita ser esterilizado. Esterilidad en el agua se mantiene mediante la adición de 2 gotas de Acido molar 12 a 8 litros de agua del RO, que se acidifica el agua a un pH de 2.5-3 y el límite de crecimiento bacteriano. Luego Vierta el agua en botellas individuales y cubrir con papel de aluminio. Colocar las tapas de botella con tubos de sorber por separado en una bolsa de autoclave y ponerlo todo en un autoclave para esterilización por vapor.

Ahora vamos a discutir las condiciones ambientales estándar esenciales para el cuidado de los animales.

En el nivel de la jaula, vivienda social es obligatoria a menos que justifique científicamente o si un animal es incompatible con todos los demás. Enriquecer el ambiente con chozas de papel y materiales de anidación permiten los animales exhiben comportamientos específicos como nido edificio y cavadores, que a su vez disminuye el nivel de estrés y aumenta el bienestar general de los animales. Materiales de anidación también proporcionan una zona de dormitorio que está saturada en calmar las feromonas que ayuda con el alojamiento de múltiples ratones machos en la misma jaula. Como se mencionó anteriormente, hacia el área de nidificación de la jaula limpia a cambio de jaula ayuda a prevenir agresiones, especialmente en varones, como los animales son introducidos en un nuevo entorno. Para animales desnudo athymic, uno debe considerar proveer camas adicionales y deshebrada tipo papel anidando materiales en sus jaulas para ayudar con la termorregulación.

En el plano de la habitación, la temperatura para ratones y ratas debe ser entre 68 y 79 ° f el. El nivel de humedad de la habitación debe ser 30-70%, como niveles más bajos pueden resultar en una condición conocida como gato de cola anillada. El tercer parámetro de la habitación es la iluminación. Esto incluye la intensidad de la luz y los ciclos. Normalmente, la sala de animales se establece en 12 horas luz/12 horas ciclo oscuro. La intensidad de iluminación debe variar según la actividad en la sala. Cuando están trabajando técnicos, permite mayores niveles de iluminación. Sin embargo, se debe reducirse a aproximadamente 325 lux concluido toda actividad. Por último, el flujo de aire dentro de la habitación debe también ser controlado cuidadosamente. Un mínimo de 10-15 cambios de aire de 100% aire fresco debe ocurrir cada hora. Esto disminuye los microbios y los olores en la sala de animales.

Por último, vamos a ver cómo los investigadores están usando este conocimiento sobre los animales de laboratorio, vivienda, alimentación y medio ambiente preferencias en sus experimentos.

Como comentamos anteriormente, animales de laboratorio generalmente exhiben comportamiento de nidificación, que reduce el estrés, y los investigadores han utilizado esto como un indicador del bienestar de los animales. En este particular experimento, los científicos desarrollaron un imparcial sistema para anotar el nido construido y utilizado luego estudio el efecto de la temperatura ambiente en el comportamiento de nidificación. Como se puede ver, un aumento de temperatura había causado una significativa caída en el marcador, destacando el papel de la temperatura en bienestar animal circundante.

Dado que las ratas y ratones amor hidratos de carbono, los investigadores han utilizado piensos de diferentes formas para probar la función motora de los animales. Esto incluye análisis de destreza durante diferentes tipos de tareas de manipulación de alimentos y examinando comportamiento alcanzando tras intervención quirúrgica o farmacológica.

Por último, se sabe que las ratas y ratones son nocturnas y no prefieren zonas iluminada. Los científicos utilizan este conocimiento para la construcción de ambiente para el estudio de la ansiedad en estas especies. Por ejemplo, aquí las investigaciones introducen animales en campo abierto simple y estudiaron el tiempo empleado por el tipo salvaje y ratones knockout en el interior y exterior presentaron zonas, para analizar la caída de gen de efecto sobre la ansiedad-como comportamiento.

Sólo ha visto la introducción de Zeus a los procedimientos de atención esencial para ratones y ratas. Ahora debería tener una mejor comprensión de las medidas se deben tomar para asegurar que el medio ambiente y el manejo de estos animales no causa ningún daño a la salud del animal y usted debe también saber cómo los investigadores pueden modificar estos parámetros para conseguir diferentes objetivos científicos. ¡Como siempre, gracias por ver!

X

Simple Hit Counter