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Diagnóstico autopsia y la cosecha de tejido
 

Diagnóstico autopsia y la cosecha de tejido

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significado de necropsia autopsia de órganos- y cosecha de tejido son componentes integrales de muchos experimentos de laboratorio, que se basan en el tiempo de colección de datos final puntos de recogida de la Análisis de los órganos cosechados. Por lo tanto, es importante aprender la necropsia diagnóstico correcto y el tejido recolección técnica, el procedimiento puede afectar significativamente la calidad de las muestras recogidas. Esta presentación revisará el método de disección y extracción de órganos torácicos, abdominales y reproductivas de animales de laboratorio.

antes de comenzar con el procedimiento, una forma debe iniciarse que incluye una historia completa del animal: género número, identificación animal, condiciones, fecha de nacimiento, fecha de la muerte, estudio de la vivienda / número de protocolo y el nombre del investigador principio.

a continuación, prepare la zona de disección. Colocar una cubierta de banco, bandeja de disección, instrumentos designados para la autopsia, que incluye tijeras, pinzas, hoja de bisturí estéril, cortadoras de hueso, sonda Roma, pequeña espátula y material de sutura no absorbible. Cosecha de órganos y tejidos para la examinación histológica requieren que los tejidos se conservan en una solución fijadora. A menos que se especifique lo contrario, el fijador más utilizado es el 10% de formalina tamponada neutra. Tenga en cuenta que las muestras de tejido deben ser de 0.5-1 cm de espesor para permitir la suficiente penetración de la solución fijadora. La fijación evita caries, autólisis y putrefacción; detiene cualquier curso reacciones bioquímicas; y puede aumentar la resistencia mecánica y estabilidad de los tejidos tratados.

El método de la eutanasia del animal también puede afectar a la calidad de las muestras. El método de eutanasia más comúnmente utilizado para ratones y ratas es una sobredosis de dióxido de carbono. Los animales se quedan en su casa jaula, que se coloca en una cámara, y CO2 se introduce gradualmente en la cámara a una velocidad de desplazamiento de 10-30% del volumen/minuto de cámara. Esto hace que los animales a perder el conocimiento antes de la percepción del dolor que se asocia con la activación del nociceptor por ácido carbónico. El flujo se mantiene en la cámara hasta que se ha producido la detención respiratoria y el animal está muerto.

después de la eutanasia, primero realizar una examinación externa inicial inspeccionando visualmente el cadáver para lesiones y masas, crecimiento excesivo del diente o una tinción de la piel en la boca, fosas nasales, orejas, ojos y los orificios anales y genitales. Si se justifica, realizar una prueba de la cinta, raspado de la piel y lanzan exámenes para detectar parásitos externos. Una vez finalizado el examen externo, es momento de comenzar la autopsia, a partir de la cavidad abdominal. Tenga en cuenta que antes de quitar cualquier tejido lo muestras es importante para observar los órganos en situ.

Para comenzar suprimiendo la piel, coloque un pequeño corte justo anterior a la pelvis en las hembras y por encima del prepucio en los machos. Entonces, usando la técnica de disección Roma, afloje la piel de la fascia y el músculo. Disección Roma es una técnica de disección anatómica en que los tejidos están separados y las estructuras subyacentes expuestas sin corte. En esta técnica, las tijeras se utilizan para extender tejidos apartes en lugar de cortarlos aparte. Las puntas cerradas son empujadas en tejido y abrió para dividir el tejido a lo largo de planos naturales. Este proceso requiere paciencia y un toque delicado, como el estiramiento de los tejidos puede resultar en daño a órganos adyacentes y vasos sanguíneos. Luego ampliar el corte hasta el mentón. A continuación hacer, cortes transversales anterior las extremidades traseras y posterior a los miembros anteriores y realice una disección Roma para exponer la zona cervical y tórax. Debe tener cuidado extra para evitar la ruptura de los vasos carótidos en el cuello y yugular.

En las hembras, con la piel suprimida, observar el tejido mamario de la parte superior del esternón en el manubrio a los genitales de apertura en la superficie ventral, que se extiende lateralmente a ambos lados. Mujeres lactantes o embarazadas habrá aumentado el volumen de tejido mamario y la leche puede estar presente. Para suprimir las glándulas mamarias, sujete el borde de tejido con pinzas y realice una disección Roma para aflojar los archivos adjuntos a la piel. Una vez que se ha separado la glándula, puede ser colocado en una solución fijadora para análisis histológico posterior.

En esta etapa, se pueden observar las glándulas salivales submaxilares, emparejadas y situadas en la mandíbula, que se extiende a lo largo de la nuca hasta el esternón manubrio. Extirpación de estas glándulas requiere disección Roma y mucho cuidado cuando se trabaja en la región cervical para evitar la ruptura de los vasos sanguíneos. Una vez liberado de los músculos, levante las glándulas y cortar cualquier accesorio residual. Las glándulas requieren al menos un corte para permitir la penetración del fijador.

Además, se puede ver la tráquea, que se extiende desde la epiglotis hasta la bifurcación de los bronquios. Es un tubo acanalado, cartilaginoso que es flexible. Mientras que normalmente claro, eutanasia con CO2 puede causar acumulación de líquido en los pulmones y la tráquea que se parece a un líquido claro espumoso. Grasa subcutánea también estará presente en esta área. Evaluar para la cantidad y la deposición. Un animal obeso puede tener una gran cantidad de grasa con la piel engrosada.

Antes de abrir la cavidad del cuerpo, observar la musculatura abdominal, intercostal y expuesta del cuello y extremidades por masas, engrosamiento o decoloración. Para abrir la cavidad del cuerpo, primero hacer un pequeño transversal corte punto más caudal del músculo abdominal expuesto. Entonces levantar los músculos de los órganos y cortar a lo largo de la linea alba al xifoides. A continuación, disecar los músculos lateralmente de la línea media apenas sobre las extremidades traseras en ambos lados. Por último, cortar a lo largo de la curva de las costillas en ambos lados. Una vez abierta la cavidad del cuerpo, evaluar la cantidad y acumulación de grasa abdominal. Un animal sano tendrá cojines gordos abdominales y algo de grasa a lo largo de la superficie dorsal de la cavidad. Observar el color de este tejido y observar cualquier anormalidad.

ahora estamos listos para comenzar la cosecha de órganos abdominales. Comenzar por localizar el bazo, que es rojo oscuro y situado a lo largo de la curvatura menor del estómago. Se debe regular en forma y con una superficie ligeramente mate. Para quitar el spleen, levante el órgano y cortar los accesorios hasta el estómago.

El estómago está situado en el extremo distal del esófago. Parece que es dos tonos, diferenciando las porciones musculares y glandulares. Sentir presencia de alimentos. Cabe destacar un estómago vacío, ya que puede ser indicativo de enfermedad. Hacer no cortar el estómago, como el contenido contaminará los órganos en la cavidad abdominal.

Intestino delgado están conectados distalmente y inferior al estómago. Hay tres secciones del intestino delgado. La primera es el duodeno - un tramo más corto entre el esfínter del estómago posterior y el inicio del yeyuno. Entra aquí a la vía biliar y el tejido pancreático se une más firmemente a esta porción del intestino delgado. El yeyuno es la parte central. Peyer ' s parches, que son áreas ovales pequeñas compuestas de tejido linfoide, puede observarse en la superficie del yeyuno y el íleon. El íleon es la parte más larga del intestino delgado que termina en el ciego - ubicado en el cruce del pequeño e intestinos grandes. El ciego aparece verdoso en color y es muy suave.

El intestino continúa desde el ciego hasta el ano. Es fácilmente identificable como pelotillas fecales pueden visualizarse dentro de la luz de esta estructura. Los intestinos delgado y grueso están anclados al cuerpo por el mesenterio, una membrana que contiene vasos sanguíneos, grasa y ganglios linfáticos. Esto debe examinarse para agrandamiento de ganglios linfáticos y cualquier masas antes de la remoción del tracto intestinal. El páncreas es una posterior órgano difuso localizado en el estómago. Es un ligero bronceado color gris y compuesto por múltiples lóbulos pequeños con bordes irregulares. Para cosechar el páncreas, el órgano de agarre y suavemente la burlan del tejido circundante de la mesentérico. Esto debe hacerse antes de la remoción del tracto intestinal.

Para quitar todo el tracto como una sola pieza comenzando por el estómago que se extiende hasta el ano, primero colocar una ligadura en el recto y luego realizar un corte a través el intestino apenas anterior del ano. A continuación, colocar una ligadura en la Unión del esófago y el estómago, después de que se puede levantar todo el tracto intestinal y cualquier accesorio membranosa cortado. Todo se puede separa del mesentery, cortar en secciones y fijo.

Los riñones son órganos pares ubicados contra la musculatura de la espalda. Deben ser del tamaño y el color de un frijol oscuro y tienen una superficie lisa. Inmediatamente anterior del riñón es la glándula suprarrenal que aparece como un pequeño nódulo rosado luz.

Para quitar un riñón, aislarlo utilizando un fórceps y corte entre el órgano y el uréter. La capa externa dura se puede pelar apagado para examinar la superficie. Cortar transversalmente un riñón por la mitad a lo largo del eje y el otro. Cualquier grano dentro puede indicar la presencia de cristales o depósitos minerales. Por último, retire el hígado, que es un color rojo oscuro en color y sus márgenes deben ser lisos con un borde nítido. Debe tenerse cuidado al manejar el hígado, que es un tejido friable. Cualquier alteración a la integridad del órgano resultará en sangre que se escapa en la cavidad del cuerpo y ocultar otros órganos.

Para extraer el hígado, primero suavemente reflejan los lóbulos de la membrana y hacer un corte a través de los vasos sanguíneos anterior a la estructura. A continuación, reflejar el hígado hacia el diafragma y agarre el nodo fibroso que conecta los lóbulos central. Por último, levante el órgano mientras cortar todos los aditamentos que el tracto intestinal y el estómago.

el sistema reproductor femenino consiste en el útero y los ovarios. El útero es una estructura en forma de Y corta con cuernos que se extiende en ambas direcciones. Los cuernos terminan en las trompas de Falopio y los ovarios--situados justo debajo de los riñones. Los ovarios tienen una superficie áspera debido a estadios diferentes de maduración de los folículos.

Para quitar los ovarios, cortados los accesorios arteriales anterior y la trompa de Falopio posteriorly. Para quitar el útero, suavemente agarre y corte por debajo del cuello uterino. Después del corte, levantar el cuerpo y los cuernos del útero rompiendo cualquier accesorio en la cavidad del cuerpo.

En los machos, también se pueden observar las glándulas prepuciales situadas justo anterior del prepucio. Aparecen grandes y son de un gris a un color amarillento con una apariencia espumosa. Extracción y fijación de estas glándulas es similar a las glándulas submaxilares. Además, el sistema reproductor masculino consta de vesículas seminales, la próstata y los testículos. Las vesículas seminales son blancas, " ram ' cuerno de s en forma de " estructuras situado anterior a la vejiga urinaria y atado en la línea media en la glándula prostática.

La próstata--tan generalmente ligera en color--se encuentra alrededor de la vejiga urinaria en la base. Para visualizar los testículos, tome las pastillas grasa abdominales situadas en la parte inferior del abdomen y tire de ellas hacia delante. Esto empujará los testículos del escroto a examen. La superficie debe ser lisa con evidente en la superficie fina vascularización.

El epidídimo se encuentra en el margen inferior de los testículos y se va estrechando hacia la parte superior. El conducto deferente se une al final del epidídimo y conduce de nuevo a la próstata. Para quitar los testículos, cortar el accesorio en el escroto y cortar los conductos deferentes. Para quitar la próstata y las vesículas seminales, asirla por la base de la vejiga urinaria y levantarla mientras cortar los accesorios debajo de la próstata.

movimiento a los órganos dentro de la cavidad torácica. Para exponer las estructuras vitales, retire el diafragma de la fijación a las costillas. A continuación, cortar a través de la caja torácica lateralmente a ambos lados hasta la parte superior del esternón manubrio y luego reflejar los huesos cranially para visualizar los órganos torácicos.

Los pulmones son normalmente un color rosa brillante, esponjoso en textura con una superficie lisa. Sin embargo la eutanasia con CO2 puede causar hemorragias pulmonares resultando en manchas rojas oscuras que pueden cubrir la superficie del pulmón entero.

El corazón es rojo oscuro y los ventrículos son musculares, que sentirse firmes al tacto. Las aurículas son rojo oscuro en color y en la parte superior de los ventrículos. Son mucho menos musculares y aparecen flácidos. Una fina membrana transparente llamada el saco pericardial rodea el corazón.

El timo se encuentra anterior al corazón y se sienta sobre la tráquea. Debe ser suave en textura. Usted puede ver la tráquea como se describe antes, y el esófago es un tubo muy delgado que se encuentra directamente detrás de la tráquea y detrás del corazón y atraviesa el diafragma hasta el estómago.

Para quitar los órganos en la cavidad torácica, comienza sujetando la tráquea justo por encima de la timo y realice un corte perpendicular a anterior el fórceps. Manteniendo el agarre, levante la tráquea caudalmente y cortar cualquier accesorio de los pulmones a la superficie de la columna vertebral en la caja torácica. El esófago puede necesitar ser cortado para poder levantar el corazón y los pulmones libres de la cavidad torácica

después de que el corazón es removido para el cuerpo, lavarlo con solución salina para eliminar la sangre residual y coágulos, o llenarlo con el fijador a través de la aorta. Una vez que los pulmones son suprimidos, colocaron una ligadura suelta alrededor de la tráquea. Luego, enhebrar una aguja conectada a una jeringa que contiene el fijador en el lumen de la tráquea y apretar la ligadura. Luego inyecte el fijador hasta que se inflan los pulmones. Por último, retire la aguja y apriete la ligadura para evitar pérdidas.

con este aliento de conocimiento con respecto a la cosecha de tejido y necropsia roedor, que ' s ver algunas de the actual laboratorio experimentos con estos procedimientos.

Necropsia diagnóstico es un punto final común en los experimentos de metástasis de cáncer. En este ejemplo, los investigadores inyectan células cancerosas en el roedor ' bazo s, treinta a sesenta días más tarde, llevaron a cabo la autopsia, que reveló metástasis hepáticas importantes.

es a menudo seguida por análisis histológico, que ayuda en el estudio de la anatomía microscópica de la muestra. Siguiendo el protocolo de fijación, inclusión, corte y tinción de los tejidos, los investigadores son capaces de estudiar las estructuras microscópicas en estos órganos y descubrir el efecto de las intervenciones genéticas o farmacológicos a nivel atómico.

a veces los investigadores eliminar tejidos para estudiar los procesos fisiológicos, como la angiogénesis. Aquí, los experimentadores exteriorizada una rata ' tejido mesentérico s para estimular el crecimiento vascular. Entonces, cosechó algunas secciones y trataron con los marcadores que se tiñen las células de cualquier vaso sanguíneo, para el estudio de la dinámica celular implicada en el crecimiento de la red vascular.

te ' ve a Miró JoVE ' s vídeo detallando los pasos de la cosecha de necropsia y tejido diagnóstico en animales de laboratorio. Es importante utilizar las técnicas adecuadas para el retiro del órgano y preservación, para que el procedimiento de extracción no tiene efecto en la interpretación de los datos recogidos. Como siempre, gracias por ver!

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