קציר רקמות סטריליות

טכניקה אספטית יש לעקוב כדי להבטיח את הסטריליות של הרקמות. הקציר מבוצע במכסה המנוע לזרם למינאר שחוטא באלכוהול. כל החומרים המשמשים חייבים להיות מעוקרים. הטכנאי המבצע את הקציר חייב לתרום ציוד מגן אישי, כולל מסכה, גוף, שמלת כירורגית סטרילית וכפפות כירורגיות סטריליות. השמלה חייבת לכסות את פרקי כף היד כדי למנוע שפיכת תאי עור לתוך חלל הגוף הפתוח, צלחות פטרי, או מדיום סטרילי. כדי לשמור על סטריליות של הטכנאי, הליך זה דורש כי טכנאי שני, nonsterile לסייע לטכנאי סטרילי עם המתת חסד של בעלי החיים.

בניסויים הדורשים פרופילים מטבוליים של רקמות, השיטה של קציר רקמות יש השפעה רבה על איכות הנתונים שנאספו. ² הן הליך המתת החסד והן משך הזמן שהקציר לוקח יכולים להשפיע על שלמות הרקמות. היפוקסיה, תוצאה של המתת חסד עם פחמן דו חמצני, הוכח שיש השפעה עמוקה על מטבוליטים ברקמות. דימום של כלי השיט ברקמת הריאה נגרם גם על ידי שימוש בפחמן דו חמצני להמתת חסד. סדר הסרת הרקמות כאשר ניתוח רציף של רקמות ממוקדות מבוצע יכול לגרום לשינויים מטבוליים, כמו הרקמות להתחיל להזדקן או לדעוק במהלך הקציר.

בעוד שרוב היבול הסטרילי מכוון לאיבר אחד, ייתכנו זמנים שבהם יש צורך ביותר מאיבר אחד. במהלך ניתוח רציף, הרקמות הנדרשות יכתיבו את הסדר שבו יש להסירן. ^{2 רקמות} כי להשפיל במהירות חייב להיות נקטף מהר ככל האפשר לאחר המתת חסד. כדי לשמור על סטריליות של המכשירים, איברים שנקטפו מחלל הבטן מוסרים בסדר הבא: טחול, כבד, כליות, בלוטות יותרת הכליה, השחלות או האשכים, איברי מין אביזר (הערמונית, שלפוחיות הזרע, הרחם, החצוצרות), רקמת הלבלב, בלוטות הלימפה, שלפוחית השתן, ודרכי המעי (הקיבה, המעי הדק והמעי הגס). הסדר של קציר האיברים מחלל בית החזה הוא להסיר תחילה את הלב והריאות ואחריו את האוסף של תימוס, בלוטות הלימפה והוושט. ³ כפפות חדשות נדרשות עבור כל עכבר.

ייתכן שיהיה צורך לשמר חלק מהאיברים הסטריליים שנקטפו. שימור הרקמות מתבצע על ידי הקפאת הבזק עם חנקן נוזלי (LN₂₎או עם שילוב של LN 2 ו 2-מתילבוטן. עבור LN₂ בלבד, הרקמות נשטפות מלוחות סטריליות, מוכתמות על מטלית סופגת סטרילית כדי לרוקן לחות עודפת, ממוקמת בריבועי רדיד אלומיניום סטריליים, ומיד שקועה לתוך LN₂. ² עבור דגימות אימונולוגיות, מתווסף 2-מתילבוטן. הרקמה למעשה שקועה לתוך 2-מתילבוטן כי כבר התקרר על ידי LN₂. כאשר הרקמות הפכו לבנות, הן מוסרות מן 2-מתילבוטן, להציב בחבילות סטריליות, ולאחר מכן להציב ישירות לתוך LN₂.

1. הכנה

1. החומרים הנפוצים כוללים 70% אלכוהול בבקבוק התזה, מחטים סטריליות 20-25 מד, שתי חבילות של מכשירים סטריליים של מספריים קשתית ומלקחיים אגודל (אחד לעור ואחד עבור הרקמות הפנימיות), מגבות נייר, כפפות מנתח סטריליות, צלחת פטרי סטרילית, מדיום סטרילי, מלוחים סטריליים.
2. מאוורר מכסה המנוע צריך לרוץ לפחות 15 דקות לפני ההליך, וזה צריך להיות מחוטא עם 70% אלכוהול.
3. אם מכסה המנוע מצויד במנורת עיקור UV, ניתן להשתמש בו כדי לחטא עוד יותר את משטח העבודה.
4. כפפות נקיות משוחקות להתקנת מכסה המנוע. הציוד טעון לתוך מכסה המנוע בסדר שבו הם ישמשו, בדרך כלל משמאל לימין. הדבר מאפשר לבצע את העבודה בזרימת עבודה חד-כיוונית, ומונע מפריטים מלוכלכים לזהם פריטים נקיים. זה יגן על הרקמות או האיברים שנקטפו מפני זיהום מקרי מפני פגרי בעלי החיים.
5. חבילות המכשירים הסטריליות נפתחות, ומכבדות את הפנים הסטריליות של החבילות. כדי לשמור על סטריליות, החבילה ממוקמת במרכז השולחן, וכל דש נפתח מבלי לחצות את השדה הסטרילי או את החלק הפנימי של החבילה. האדם הלא סטרילי פותח את הדש העליון הראשון על ידי שיקוף אותו בשבילו/ היא. לאחר מכן נפתחים המדפים הצדדיים באמצעות שתי הידיים-אחת על כל דש ומושכים אותם הרחק מהחבילה. הדש הסופי נמשך לכיוון האדם הפותח את הלהקה, דואג להימנע מלגעת בכל המשטחים הפנימיים של הלהקה.
6. מניחים את מגבות הנייר לתוך מכסה המנוע, ומרטיבים אותם באלכוהול.
7. האדם הלא סטרילי יתחסד עם החיות.
8. האדם הסטרילי לובש שני סטים של כפפות כירורגיות סטריליות.
9. האדם הלא סטרילי מניח את הפגר על מגבות הנייר וסופג לחלוטין את הפגר עם 70% אלכוהול.
10. באמצעות קבוצה אחת של מספריים סטריליים ומלקחיים, לעשות חתך אופקי בעור רק קהורית prepuce (אצל זכרים) או עצם האגן (אצל נקבות). הימנע חיתוך דרך שרירי הבטן.
11. מניחים את הכלים בצד.

2. קצירת רקמות

1. לעשות חתך קטן רק קהורי לאגן אצל נקבות ומעל prepuce אצל גברים.
2. מניחים את האגודל מתחת לחתך ותופסים את קצה הגולגולת של החתך. באמצעות היד השנייה, להחזיק בבטחה את הגפיים האחוריות והזנב תוך משיכת העור לכיוון הראש.
3. העור יקרע את הגוף ממש מעל הגפיים האחוריות וניתן להפוך אותו מבפנים החוצה מעל הראש ואת הרגליים. זה מסיר ביעילות מזהמי שיער במהלך קציר איברים.
4. להשרות את הגוף שוב עם 70% אלכוהול, ולהסיר את זוג כפפות שטחי כי הם כבר לא סטריליים.
5. פתח את חלל הבטן באמצעות מכשירים סטריליים.
   1. טחול
      1. כדי לקצור את הטחול, הגוף ממוקם ב recumbency לרוחב ימין.
      2. הטחול יכול להיות חזותי דרך שריר הבטן.
      3. חתך מספריים נעשה ישירות מעל הטחול.
      4. הטחול נסוג בעדינות מחלל הגוף.
      5. בעת חיתוך כל ההחזקות בין הטחול, הבטן ורקמת הלבלב, הימנע מנקיבה או קריעת האיבר.
   2. כבד
      1. כדי לקצור כל איברי בטן אחרים, הגוף ממוקם recumbency הגב.
      2. שריר הבטן הוא הרים לחתוך משם, משאיר פתח אליפסה ישירות מעל חלל הבטן.
      3. לאחר חשיפת חלל הבטן, לשקף את הכבד caudally מן הסרעפת.
      4. בזהירות לנתק את כל הממברנות חיבור הכבד לסרעפת.
      5. הפוך חתך בניצב לעמוד השדרה דרך כלי הדם הנראים בין הכבד והסרעפת.
      6. הרם את הכבד ולשקף אותו לכיוון הסרעפת כדי לדמיין את ההחזקות מתחתיו.
      7. יהיו ממברנות דקות חיבור אונות הכבד הקטנות יותר לקיבה והמעי הדק, אשר יצטרך להיות שיבש.
      8. לתפוס את הצומת סיבי במרכז הכבד על החלק התחתון שלה, ולהרים את האיבר כדי למצוא את כל ההחזקות. להפריד את הכבד מן האיברים הבסיסיים ורקמות.
      9. שים לב כי הכבד הוא שביר והוא יכול להיות מנוקב בקלות, וכתוצאה מכך שחרור של דם; לכן, יש לטפל בו בזהירות.
   3. הכליות
      1. לאחר חשיפת חלל הבטן, לדחוף את המעיים שמאלה כדי לדמיין את הכליה הימנית, או ימינה כדי לדמיין את הכליה השמאלית.
      2. כדי להסיר את הכליה, השתמש בלהבי מלקחיים כדי לתפוס מתחת לכליה כדי לבודד את האיבר מהגוף. באמצעות מספריים או להב אזמל, לחתוך את הכליה הרחק מהגוף. הפוך את החתך מתחת למלקחיים כדי למנוע פגיעה בכליה.
      3. לאחר הסרת הכליה, כל שומן ניתן לקצץ מן האיבר.
   4. שחלה
      1. לאחר חשיפת חלל הבטן, להזיז את המעיים cranially כדי לדמיין את הרחם.
      2. תעקוב אחרי השמאל, ואז ימינה, קרני הרחם אל השחלות.
      3. השחלות קטנות. אצל בעלי חיים מבוגרים יותר, הם עשויים להיות תוחמים בשומן.
      4. להחליק את המלקחיים מתחת השחלה כדי לבודד אותו מהגוף, ולחתוך אותו ללא השומן ואת החצוצרה.
   5. האשכים
      1. לאחר פתיחת חלל הבטן, בעדינות לתפוס את כרית השומן מפשעתי ולמשוך אותו בקפיים.
      2. זה יוציא את האשכים משק האשכים.
      3. ברגע שהאשכים נחשפים, חותכים את ההחזקות לשק האשכים והווס דוחה לשחרר אותו מהגוף.
      4. זה נעשה עבור כל אשך.
6. חלל בית החזה נפתח כדי להסיר את איברי בית החזה
   1. הגוף ממוקם בנסיגה הגבית. זה הכרחי כי העור לבוא לידי ביטוי הרבה מעל הראש אם איברי חלל בית החזה הם להיות נקצרים.
   2. לתפוס את תהליך xiphoid ולהרים כדי לאפשר לחתוך דרך שריר הבטן רק caudal לצלעות. להאריך את החתך לאורך העקומה התחתונה של כלוב הצלעות משני הצדדים. זה יאפשר הדמיה של הסרעפת.
   3. לנקב את הסרעפת על ידי ביצוע חתך קטן בכלוב הצלעות בנקודה הצדדית ביותר האפשרית בכל צד. חותכים את הסרעפת מהצלעות.
   4. הרם את הצלעות ב xiphoid לדמיין את איברי בית החזה.
   5. מרחיבים את החתך לרוחב לחלק העליון של החזה משני הצדדים, ופותחים את החזה.
   6. הלב והריאות מוסרים בקלות רבה יותר יחד.
      1. מניחים את המלקחיים בניצב אל קנה הנשימה, ותופסים את קנה הנשימה בחוזקה.
      2. באמצעות המספריים, לעשות לחתוך בניצב קנה הנשימה רק קהור למלקחיים. חתך זה צריך לנתק את קנה הנשימה והוושט.
      3. מבלי לשחרר את האחיזה על קנה הנשימה, הרימו את קנה הנשימה למעלה וקדוחים. לגזום כל קבצים מצורפים של הריאות למשטח עמוד השדרה בכלוב הצלעות.
      4. הוושט עשוי להיות חתוך כדי להיות מסוגל להרים את הלב והריאות ללא חלל החזה.
   7. לב בלבד
      1. הרימו את הלב וחתכו בזהירות את שק קרום הלב.
      2. העורקים נמצא בהיבט הגולגולתי של הלב משמאלו של בעל החיים.
      3. מחזיק את העורקים עם המלקחיים, לעשות דיסטל לחתוך למלקחיים, שמירה על אחיזה בבי העורקים והלב.
      4. תפוס את באבי העורקים כפי שאתה לנתק את הוורידים הצעירים והעורקים הוורידים הריאתיים.
      5. הרם את הלב ללא חלל בית החזה על ידי עורק העורקים.
   8. איברי בית החזה האחרים
      1. איברים נקצרים בסדר הבא כדי לשמור על סטריליות של המכשירים: תימוס, בלוטות הלימפה, ושט.
7. מוח
   1. בנסיבות מיוחדות, המוח יצטרך להיות נקטף לתרבות סטרילית.
   2. המוח נקצר אחרון לאחר כל קציר איברים אחר.
   3. במקרים שבהם המוח הוא האיבר היחיד שיש לאסוף, העור אינו מופשט מהגוף, אלא חתך נעשה בעורף הצוואר ומורחב לאורך קו האמצע מאזור צוואר הרחם הגב ועד קצה האף.
   4. לאחר משיכת העור מן הגולגולת לרוחב, העצם חשופה ספוגה עם 70% אלכוהול ואת הכפפות העליונות מלוכלכות מוסרים.
   5. באמצעות זוג ייעודי של מספריים קציר מוח סטרילי, לעשות לחתוך דרך עמוד השדרה בבסיס הגולגולת.
   6. פתח את הגולגולת על ידי הצבת נקודת המספריים במגנום פורם וחיתוך לאורך קו האמצע.
   7. השתמש בקצה השטוח של להב המספריים כדי למנף את העצמות הקודקודיות הרחק מהמוח.
   8. בזהירות לשבש את העצבים המצורפים בגזע המוח, ואת chiasm אופטי מתחת למוח, באמצעות הנקודה הסגורה של מלקחיים האגודל.
   9. באופן דומה, להחליק את המלקחיים הסגורים בקהלה מתחת למוח ולשבור את ההחזקות בנורות הריח.
   10. לאחר מכן ניתן להפיל את המוח מהגולגולת למדיום סטרילי.
   11. בעת קצירת המוח, יד אחת תיחשב לא סטרילית כפי שהיא תופסת את העור מהגולגולת משתקף מתחת לסנטר כדי לייצב את הראש, בעוד הגולגולת נחתכת והמוח מוסר.
8. עור
   1. רקמת המאמרי
      1. רקמת המאמרי נמצאת מראש עצמות החזה במנובריום ועד פתח איברי המין על פני השטח הגחון, ונמשכת לרוחב משני הצדדים, וכמעט נוגעת במשטח הגפי בירכיים ובכתפיים.
      2. בדוק את רקמת המא המאמרי כדי לחפש גושים, שינויי צבע או חריגות. נקבות מניקות או בהריון יהיה נפח רקמת החלב מוגברת, חלב עשוי להיות נוכח.
      3. כריתה של בלוטות החלב דורשת אחיזה בקצה הבלוטה עם מלקחיים אגודל ושימוש בביתור קהה כדי לשחרר קבצים מצורפים לעור. לאחר הבלוטה הופרדה מן העור, מספריים קשתית ניתן להשתמש כדי לחתוך את כל הקבצים המצורפים הנותרים.
      4. להשרות את המשטחים החשופים עם 70% אלכוהול ולהתחיל את קציר של רקמות באמצעות קבוצה חדשה של מכשירים סטריליים.
      5. הרקמה שנקטפה נשטפת עם תמיסת מלח סטרילית לפני הצבתה במדיום התרבותי.
   2. גידולים תת עוריים
      1. לעתים קרובות, תאים סרטניים מושתלים שוב ושוב בבעלי חיים, ולאחר מכן הגידול המתקבל נקצר כדי לשמור על קו תא הגידול.
      2. זה הכרחי כי קציר רקמות סטריליות של גידולים תת עוריים להתבצע לפני ההפרה של שלמות העור.
      3. אם המסה שוחקת או נמקית, הרקמה שנאספה לא תהיה באיכות טובה ולא יכולה להיות סטרילית.
      4. הגוף ממוקם כדי לחשוף את תחום העניין. העור נחתך בצד אחד של הגידול.
      5. לשקף בזהירות את העור כדי לחשוף את הגידול. מניחים את מכשירי העור בצד ומשרים את הרקמות החשופות ב-70% אלכוהול.
      6. בעזרת מכשירים סטריליים חדשים, ניתחו את המסה מההחזקות הבסיסיות וניתרו את כל כלי הדם המזינים את המסה.
      7. לאחר מכן הגידול ממוקם במדיום התרבותי.

למרות שרבים מההליכים לקציר איברים סטריליים דומים לנמק סטנדרטי, השימוש בטכניקה סטרילית הוא הכרחי עבור רקמות להיות בעל ערך עבור הליכים ניסיוניים, הכוללים קצירת תאים מן הרקמות המובאות. יצירת פרופיל או איסוף RNA מרקמות עלולים להיפגע אם הסטריליות אינה נשמרת.