멸균 조직 수확

무균 기술은 조직의 멸균을 보장하기 위해 따라야합니다. 수확은 알코올에 감염된 라미나르 흐름 후드에서 수행됩니다. 사용된 모든 재료는 살균해야 합니다. 수확을 수행하는 기술자는 마스크, 부퍼, 멸균 수술 가운 및 멸균 수술 장갑을 포함한 개인 보호 장비를 착용해야합니다. 가운은 피부 세포가 열린 신체 구멍, 페트리 접시 또는 멸균 매체로 흘러 들어가는 것을 방지하기 위해 손목을 덮어야합니다. 기술자의 멸균을 유지하기 위해이 절차는 두 번째 비멸 기술자가 동물의 안락사를 통해 멸균 기술자를 도와야합니다.

조직의 대사 프로파일을 필요로하는 실험에서 조직 수확 방법은 수집 된 데이터의 품질에 큰 영향을 미칩니다. ² 안락사 절차와 수확 시간이 모두 조직의 무결성에 영향을 줄 수 있습니다. 저산소증, 이산화탄소와 안락사의 결과, 조직에서 대사 산물에 깊은 영향을 미칠 것으로 나타났습니다. 폐 조직에 있는 혈관의 출혈은 또한 안락사를 위한 이산화탄소의 사용에 기인합니다. 표적 조직의 순차적 해부가 수행될 때 조직 제거의 순서는 조직이 수확 하는 동안 나이 또는 부패를 시작으로 신진 대사 변화를 일으킬 수 있습니다.

대부분의 멸균 수확은 단일 장기를 대상으로하지만, 하나 이상의 기관이 필요한 경우가 있을 수 있습니다. 순차적 해부 동안 필요한 조직은 제거해야 하는 순서를 지시합니다. ² 급속히 저하되는 조직은 안락사 에 따라 가능한 한 빨리 수확해야합니다. 계측기의 멸균을 유지하기 위해 복강에서 수확한 장기는 비장, 간, 신장, 부신, 난소 또는 고환, 부속성 기관(전립선, 정액 소포, 자궁, 나팔관), 췌장 조직, 림프절, 요로 방광 및 장내 (위장, 요로암 방광) 및 장내 (위장, 요로방) 및 장내 (위장) 및 소장 (위장)에서 제거됩니다. 흉부 구멍에서 장기 수확의 순서는 먼저 흉선, 림프절 및 식도의 수집 다음에 심장과 폐를 제거하는 것입니다. ^각 마우스에는 3개의 새로운 장갑이 필요합니다.

멸균 수확 장기 중 일부는 보존해야 할 수도 있습니다. 조직의 보존은 액체 질소 (LN_2)로플래시 동결 또는 LN₂ 및 2-메틸부탄의 조합으로 수행됩니다. LN_2단독의 경우, 조직은 멸균 식염수로 헹구고, 멸균 흡수성 천에 담그고, 여분의 수분을 고갈시키고, 멸균 알루미늄 호일 광장에 넣고, 즉시 LN_2에침수된다. ² 면역학적 표본의 경우 2-메틸부탄이 추가됩니다. 조직은 실제로 LN_2에의해 냉각된 2-메틸부탄으로 침수됩니다. 조직이 흰색으로 바뀌면 2-메틸부탄에서 제거되어 멸균 팩에 넣은 다음 LN_2에직접 배치됩니다.

1. 준비

1. 일반적으로 사용되는 재료로는 분출병에 70% 알코올, 멸균 20-25 게이지 바늘, 홍채 가위와 엄지 손가락의 멸균 기구 2 팩 (피부용 및 내부 조직을위한 하나), 종이 타월, 멸균 외과 의사 장갑, 멸균 페트리 접시, 멸균 매체 및 멸균 식염수 등이 있습니다.
2. 후드 팬은 시술 전에 적어도 15 분 동안 실행되어야하며 70 %의 알코올로 감염해야합니다.
3. 후드에 UV 살균 램프가 장착된 경우 작업 표면을 더욱 소독하는 데 사용할 수 있습니다.
4. 후드를 설치하기 위해 깨끗한 장갑을 착용합니다. 장비는 일반적으로 왼쪽에서 오른쪽으로 사용되는 순서대로 후드에 로드됩니다. 이를 통해 단방향 워크플로우에서 작업을 수행하여 더러운 품목이 깨끗한 품목을 오염시키는 것을 방지할 수 있습니다. 이것은 동물 시체에서 우발적 인 오염으로부터 수확 된 조직이나 장기를 보호 합니다.
5. 멸균 기기 팩이 열리며 패키지의 멸균 내부를 존중합니다. 멸균을 유지하기 위해 팩은 테이블 중앙에 배치되며 각 플랩은 멸균 필드 또는 팩 내부를 넘지 않고 열립니다. 무균 한 사람은 그 / 그녀를 위해 멀리 반사하여 첫 번째 상단 플랩을 엽니 다. 그런 다음 측면 플랩은 각 플랩에 양면 하나를 사용하여 열고 팩에서 멀리 당깁니다. 최종 플랩은 팩의 내부 표면을 만지지 않도록주의를 기울여 팩을 여는 사람을 향해 당겨집니다.
6. 종이 타월을 후드에 넣고 술로 적시습니다.
7. 비살균자는 동물을 안락사시킬 것입니다.
8. 멸균 사람은 멸균 수술 장갑 두 세트를 착용합니다.
9. 무균인 사람은 시체를 종이 타월에 올려놓고 70%의 알코올로 시체를 완전히 흡수합니다.
10. 멸균 가위와 집게 한 세트를 사용하여, 프레푸 (남성) 또는 골반 뼈 (여성)에 단지 앞쪽에 피부에 수평 컷을 합니다. 복 근 근육을 절단 하지 마십시오.
11. 악기를 따로 놓습니다.

2. 조직 수확

1. 암컷의 골반과 남성의 프레덕트 위에 있는 작은 컷을 만드십시오.
2. 엄지 손가락을 잘라 내기 아래에 놓고 컷의 두개골 가장자리를 잡습니다. 다른 손으로는 피부를 머리쪽으로 당기면서 뒷다리와 꼬리를 단단히 잡습니다.
3. 피부는 뒷다리 바로 위에 있는 바디에서 찢어지고 머리와 앞다리 위로 안쪽으로 돌릴 수 있습니다. 이것은 효과적으로 장기 수확 하는 동안 머리 오염 물질을 제거.
4. 70% 알코올로 몸을 다시 담그고 더 이상 멸균되지 않는 피상적인 장갑을 제거하십시오.
5. 멸균 기구를 사용하여 복강을 엽니다.
   1. 지라
      1. 비장을 수확하기 위해, 몸은 오른쪽 측면 의 재조정에 위치.
      2. 비장은 복부 근육을 통해 시각화 될 수있다.
      3. 가위 컷은 비장 위에 직접 만들어집니다.
      4. 비장은 몸구멍에서 부드럽게 후퇴합니다.
      5. 비장, 위 및 췌장 조직 사이의 모든 부착물을 절단 할 때, 기관 구멍을 뚫거나 찢어 방지 할 수 있습니다.
   2. 간
      1. 다른 복부 장기를 수확하기 위해 신체는 등쪽 의 복리수에 배치됩니다.
      2. 복부 근육은 들어 올려지고 잘라내고, 복강 위에 직접 타원형이 열리게 됩니다.
      3. 복강을 노출 한 후, 횡격막에서 멀리 간을 반사.
      4. 다이어프램에 간을 부착하는 모든 막을 조심스럽게 절속시킵니다.
      5. 간과 횡격막 사이에 보이는 혈관을 통해 척추에 수직으로 절단하십시오.
      6. 간을 들어 올리고 다이어프램쪽으로 반사하여 그 아래에 있는 부착물을 시각화합니다.
      7. 더 작은 간 엽을 위장과 소장에 부착하는 얇은 막이있을 것입니다.
      8. 그 밑면에 간 중앙에 있는 섬유성 노드를 잡고, 모든 첨부 파일을 찾기 위하여 기관을 들어 올립니다. 간을 기본 장기와 조직에서 분리합니다.
      9. 간은 깨지기 쉽고 쉽게 구멍을 뚫을 수 있으므로 혈액이 방출됩니다. 따라서 신중하게 처리해야 합니다.
   3. 신장
      1. 복강을 노출 한 후, 오른쪽 신장을 시각화하기 위해 왼쪽에 내장을 밀어, 또는 왼쪽 신장을 시각화하는 오른쪽으로.
      2. 신장을 제거하려면 집게 블레이드를 사용하여 신장 아래를 파악하여 신체에서 장기를 분리하십시오. 가위 나 메스 블레이드를 사용하여 몸에서 신장을 잘라냅니다. 신장을 손상시키지 않도록 집게 아래에 절단하십시오.
      3. 신장이 제거되면, 모든 지방은 기관에서 손질 될 수있다.
   4. 난소
      1. 복강을 노출 한 후, 자궁을 시각화하기 위해 창자를 두개골로 이동합니다.
      2. 왼쪽을 따라, 그리고 오른쪽, 난소에 자궁의 뿔.
      3. 난소는 작습니다. 오래된 동물에서는 지방에 흠이 생길 수 있습니다.
      4. 난소 아래의 집게를 밀어 몸에서 분리하고 지방과 나팔관에서 자유롭게 자릅니다.
   5. 고환
      1. 복강을 열후, 부드럽게 잉게인 지방 패드를 잡고 앞쪽으로 당깁니다.
      2. 이것은 음낭에서 고환을 당깁니다.
      3. 시험이 드러나면 음낭에 부착물을 자르고 화병은 몸에서 풀어냅니다.
      4. 각 고환에 대해 수행됩니다.
6. 흉부 구멍이 뚫리고 흉부 장기를 제거하기 위해 열립니다.
   1. 몸은 등갈에 배치됩니다. 흉부 캐비티 장기를 수확하려면 피부가 머리 위에 잘 반사되어야합니다.
   2. xiphoid 과정을 파악하고 갈비뼈에 단지 caudal 복부 근육을 통해 절단 할 수 있도록 리프트. 양쪽의 리브 케이지의 아래쪽 곡선을 따라 컷을 확장합니다. 이렇게 하면 다이어프램을 시각화할 수 있습니다.
   3. 양쪽에서 가능한 가장 측면 지점에서 늑골 케이지에 작은 컷을 만들어 다이어프램에 구멍을 뚫습니다. 갈비뼈에서 다이어프램을 잘라냅니다.
   4. 흉부 장기를 시각화하기 위해 xiphoid에서 갈비뼈를 들어 올립니다.
   5. 측면 컷을 양쪽의 흉골 꼭대기로 확장하고 가슴을 엽니다.
   6. 심장과 폐는 가장 쉽게 함께 제거됩니다.
      1. 집게를 기관에 수직으로 놓고 기관을 단단히 잡습니다.
      2. 가위를 사용하여, 집게에 단지 전방 기관수직 절단을합니다. 이 컷은 기관및 식도를 절단해야합니다.
      3. 기관지의 그립을 풀지 않고 기관차를 들어 올리고 caudally 들어 올립니다. 흉곽의 척추 표면에 폐의 부착물을 잘라.
      4. 식도는 가슴 구멍이없는 심장과 폐를 들어 올릴 수 있도록 절단해야 할 수도 있습니다.
   7. 하트 전용
      1. 심장을 들어 올리고 심근 낭을 조심스럽게 잘라냅니다.
      2. 대동맥은 동물의 왼쪽에 있는 심장의 두개골 양상에 있습니다.
      3. 대어를 집게로 잡고, 대자와 심장에 보류를 유지, 집게에 잘라 실단을합니다.
      4. 전방 베나 카바와 폐 동맥과 정맥을 끊을 때 대동맥을 잡으라.
      5. 대동맥에 의해 흉부 구멍이 없는 심장을 들어 올립니다.
   8. 다른 흉부 장기
      1. 장기는 계측기, 림프절 및 식도 : 악기의 멸균을 유지하기 위해 다음과 같은 수확된다.
7. 뇌
   1. 특별한 상황에서, 뇌는 멸균 문화를 위해 수확해야합니다.
   2. 뇌는 다른 장기 수확 후 마지막으로 수확된다.
   3. 뇌가 수집되는 유일한 기관인 경우 피부는 신체에서 벗겨지지 않고 목덜미에서 잘라내고 등경부 부위에서 코 끝까지 중간선을 따라 확장됩니다.
   4. 두개골에서 피부를 측면으로 끌어낸 후 노출된 뼈는 70%의 알코올로 적신후, 더러운 상단 장갑을 제거합니다.
   5. 멸균 뇌 수확 가위 의 전용 쌍을 사용하여, 두개골의 기지에서 척추를 통해 잘라.
   6. 두개골을 열어 가위의 지점을 포맨 매그넘에 넣고 중간선을 따라 절단합니다.
   7. 가위 블레이드의 평평한 끝을 사용하여 뇌에서 멀리 정수리 뼈를 레버.
   8. 조심스럽게 뇌 줄기의 신경 부착물을 방해하고, 엄지 손가락 집게의 닫힌 점을 사용하여 뇌 아래의 시그니즘을 방해합니다.
   9. 비슷한 방식으로 닫힌 집게를 뇌 아래에 미리 밀어 내고 후각 전구의 부착물을 끊습니다.
   10. 뇌는 다음 멸균 매체에 두개골에서 떨어질 수 있습니다.
   11. 뇌를 수확할 때, 한 손은 턱 아래에 반사된 두개골의 피부를 잡고 머리를 안정시키고 두개골이 절단되고 뇌를 제거할 때 비멸으로 간주됩니다.
8. 피부
   1. 매머 티슈
      1. 유방 조직은 복부 표면에 생식기 개구부에 주기증의 흉골 의 상단에서 발견되고, 엉덩이와 어깨에 등쪽 표면에 거의 터치, 양쪽을 옆으로 확장.
      2. 매머 조직을 검사하여 질량, 변색 또는 이상을 찾습니다. 수유 또는 임신 한 여성은 유방 조직 볼륨을 증가시킬 것이며, 우유가 존재할 수 있습니다.
      3. 유방 땀샘의 절제는 엄지 손가락 집게로 선의 가장자리를 잡고 무딘 해부를 사용하여 피부에 부착물을 풀어야합니다. 동맥이 피부와 분리되면 홍채 가위를 사용하여 남은 부착물을 절단할 수 있습니다.
      4. 노출된 표면을 70%의 알코올로 담그고 새로운 멸균 기구를 사용하여 조직의 수확을 시작합니다.
      5. 수확된 조직은 배양 배지에 넣기 전에 멸균 식염수로 헹됩니다.
   2. 피하 종양
      1. 종종 종양 세포는 반복적으로 동물에 이식되고, 그 결과 종양은 종양 세포선을 유지하기 위해 수확된다.
      2. 피하 종양의 멸균 조직 수확은 피부의 무결성을 침해하기 전에 수행해야합니다.
      3. 질량이 마모되거나 괴사인 경우 수집된 조직은 품질이 좋지 않으며 멸균되지 않을 수 있습니다.
      4. 몸은 관심 영역을 노출 할 위치. 피부는 종양의 한쪽을 따라 절단됩니다.
      5. 조심스럽게 종양을 노출피부를 반영합니다. 피부 기기를 측면에 놓고 노출된 조직을 70% 알코올로 담급니다.
      6. 새로운 멸균 기구로, 기본 부착에서 질량을 해부하고 질량을 공급하는 혈관을 분리.
      7. 종양은 배양 배지에 배치됩니다.

멸균 기관 수확을 위한 절차의 대부분은 표준 부검과 유사하더라도, 살균 기술의 사용은 세포가 절제된 조직에서 세포를 수확하는 것을 포함하는 실험 적인 절차에 대한 가치가 있는 조직에 필수적입니다. 불임이 유지되지 않으면 조직에서 RNA를 프로파일링하거나 수집하는 것이 손상될 수 있습니다.