Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Lab Animal Research

A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 20 seconds.

 

Cosecha de tejido estéril

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

demandan de muchos experimentos de colección de las células del tejido suprimido. En tales casos, es imprescindible realizar el procedimiento de recolección de tejido de forma estéril. El uso de líneas celulares y cultivos de tejidos que se originan en animales de investigación permite muchos experimentos ser realizados en vitro, whichin a su vez reduce el uso de animales en investigación.

En este video, vamos a discutir el método aséptico para la cosecha de órganos comúnmente extraídos de animales de laboratorio. Y esto será seguido por una breve revisión de algunos experimentos de ejemplo empleando esta técnica estéril para lograr objetivos de investigación diferentes.

que ' s comenzar con los pasos preparar necesarios para garantizar la esterilidad del espacio, instrumentos, personal y durante la cosecha de tejidos animales.

Este procedimiento se realiza en una campana de flujo laminar. Antes del proceso, el ventilador de la campana debe funcionar durante al menos 15 minutos y la zona debe ser desinfectada con alcohol al 70%. Luego, colocar algunas toallas de papel en la campana y mojado con etanol al 70%. Después de eso, el equipo estéril de la carga y organiza por el orden en el que cada instrumento se utilizará, generalmente de izquierda a derecha. Esto permite que el flujo de trabajo en forma unidireccional, prevención de la contaminación accidental de la canal de animales.

Se recomienda que un técnico no estériles se presenta para ayudar al técnico estéril. Ambos operadores deben llevar una máscara y un bouffant. El técnico estéril debe ponga una bata estéril y dos pares de guantes quirúrgicos estériles. Nota que el vestido y los guantes deben cubrir las muñecas para evitar el derramamiento de las células de la piel en la cavidad abierta del cuerpo, en platos de petri o medios estériles.

La persona no estéril abre el paquete estéril instrumento sin tocar la superficie interna, por lo que la persona estéril puede quitar la herramienta de forma aséptica. Por último, el técnico no estéril euthanizes animal, coloca el cadáver en las toallas de papel y totalmente empapa con alcohol al 70%, por lo que la persona estéril puede comenzar la cosecha.

en primer lugar, revisaremos la extracción de los órganos abdominales, incluyendo el bazo, hígado, riñones, ovarios y testículos.

Usando un sistema de tijeras estériles y pinza hacer un corte horizontal en la piel justo anterior del prepucio en los machos y el hueso pélvico en las mujeres. Evitar cortar a través de la musculatura abdominal. A continuación, coloque su dedo pulgar bajo el corte y sujete el borde craneal del corte. Con la otra mano, sujetar las extremidades traseras y la cola, tirando la piel hacia la cabeza. La piel se rasgan lejos del cuerpo justo encima de los miembros posteriores y puede ser el revés sobre la cabeza y patas delanteras. Esto efectivamente elimina contaminantes de cabello que puedan interferir con la cosecha de órgano estéril. Luego, sumerja el cuerpo otra vez con alcohol al 70% y quitar el superficial par de guantes, que no son estériles. También Deseche todos los instrumentos que se utilizaron en la piel.

a la cosecha el bazo, posición del cuerpo en recumbency lateral derecho. THbazo e debe ser visible a través del músculo abdominal. Utilice tijeras para hacer un corte directamente sobre el bazo y retraer suavemente el órgano de la cavidad del cuerpo. Cortar todos los accesorios entre el bazo y el estómago y el tejido pancreático, pero evitar pinchar o rasgar el órgano.

a todos los otros órganos abdominales, coloque el cuerpo en recumbency dorsal. Luego, levante y corte el músculo abdominal dejando un óvalo de apertura directamente en la cavidad abdominal. Para cosechar el hígado, reflejan el órgano caudalmente de la membrana. Ahora utilice tijeras para cortar cuidadosamente cualquier membranas entre las dos estructuras. A continuación, hacer un corte perpendicular a la espina dorsal a través de los vasos sanguíneos. Luego levantar el hígado y reflejan hacia el diafragma para visualizar los archivos adjuntos debajo de él. Habrá finas membranas adjuntando los pequeños lóbulos de hígado en el estómago y el intestino delgado. Sujete el nodo fibroso en el centro del hígado en la parte inferior y el órgano para encontrar todos los accesorios de Levante. Ahora separar el órgano de los tejidos subyacentes. Tenga en cuenta que el hígado es frágil y puede perforarse fácilmente dando por resultado la liberación excesiva de la sangre. Por lo tanto, debe ser manipulado con cuidado.

a los riñones, empujar los intestinos a la izquierda para exponer el riñón derecho o a la derecha para descubrir el riñón izquierdo. Ahora uso las cuchillas pinza agarrar bajo el riñón y con unas tijeras cortadas bajo el fórceps, extracción del órgano del cuerpo.

Mover los intestinos cranially a visualizar el útero a los ovarios. Siga a la izquierda y los cuernos uterinos derecho a los ovarios. Estos son órganos pequeños y en animales más viejos pueden ser incrustados en la grasa. Deslice la pinza bajo el ovario fin de aislarlo del cuerpo libre de la grasa y la trompa de Falopio.

En los machos, para quitar los testículos, sujete la almohadilla de grasa inguinal y tire suavemente hacia delante. Esto tirará el testículo del escroto. Una vez que llegan a ser visibles, cortar los accesorios para el escroto y el conducto deferente a estas estructuras del cuerpo.

a continuación, deje que ' s aprender a cosechar órganos torácicos, tales como el corazón y los pulmones. El corazón y los pulmones se quitan más fácilmente juntos. Para abrir la cavidad torácica, comience por colocar el animal en recumbency dorsal. En primer lugar, sujete y levante el proceso del xiphoid. Luego realizar un corte a través del músculo abdominal caudal justo en las costillas. Ampliar el corte a lo largo de la curva inferior de la caja torácica a ambos lados, exponiendo la membrana.

a continuación, perfore el diafragma haciendo un pequeño corte en la caja torácica punto a lo más lateral posible en cada lado. Luego, se corta el diafragma de las costillas. Ahora levantar las costillas en el xifoides para visualizar los órganos torácicos. Extender los laterales cortar la parte superior del esternón en ambos lados para abrir el cofre. Luego coloca la pinza perpendicular a la tráquea y sujete firmemente la tráquea. Ahora, usando las tijeras, realice un corte perpendicular a anterior el fórceps. Esto debería cortar la tráquea y el esófago. Sin aflojar el apretón en la tráquea, levante caudalmente y cortar cualquier accesorio de los pulmones a la superficie de la columna vertebral en la caja torácica. Continúe hasta que usted es capaz de levantar el corazón y los pulmones libres de la cavidad torácica.

Para eliminar sólo el corazón, el órgano de Levante y corte cuidadosamente a través del saco pericárdico. A continuación, sostenga la aorta con las pinzas y hacer un corte distal a las pinzas. Luego separa el anterior de la vena cava, arterias pulmonares y las venas. Después de eso, usted debe ser capaz de levantar el corazón libre de la cavidad torácica.

, pues ' s revisar el procedimiento de recolección el cerebro mediante una técnica aséptica. En casos donde el cerebro es el único órgano que se recogerá, el preparar pasos son los mismos.

Para iniciar la cosecha, saturar el cuerpo con alcohol y tira de la piel del cuerpo como antes, encima y sobre el cráneo. Esto permite que todo sea estéril desde este punto hacia adelante. Entonces, saturar el animal con el alcohol, retire los guantes exteriores y desechar los instrumentos utilizados en la piel. Ahora hacer un corte en la nuca del cuello y extenderlo a lo largo de la línea media de la zona cervical dorsal hasta la punta de la nariz.

Ahora, con una dedicada cerebro estéril tijeras de cosecha, hacer un corte a través de la columna vertebral en la base del cráneo. Para abrir el cráneo, coloque la punta de las tijeras en el foramen magnum y corte a lo largo de la línea media. Tenga en cuenta que durante este procedimiento de cerebro, una mano se considera no estéril como agarra la piel del cráneo refleja debajo de la barbilla a la cabeza, mientras la mano estéril se utiliza para cortar el cráneo. Después de eso, utilice el borde plano de la hoja de tijera de palanca de los huesos parietales del cerebro. Y con cuidado utilizando la espátula, interrumpir los accesorios del nervio en el tronco cerebral y el quiasma óptico, debajo del cerebro. Por último, deslice la pinza cerrada anterior y romper los accesorios en los bulbos olfativos. Y el cerebro puede entonces ser caído del cráneo directamente los medios estériles.

ahora que ' ve revisó los elementos esenciales de la cosecha de tejido estéril, que ' s discutir algunas de las muchas aplicaciones de este procedimiento en la investigación biomédica.

Vástago neuronales los investigadores utilizan una técnica recolección estéril para extraer tejido del cerebro neonatal ratón, crecer estas células en vitro. Esto les permite estudiar el papel de las células madre neurales en el desarrollo y progresión del cáncer de.

Otra área activa de investigación que implica la cosecha de tejido es perfilado metabólico, que implica estudiar la fisiología del tejido mediante el análisis de los diferentes metabolitos en una muestra. En este ejemplo, los científicos, usando una técnica aséptica, recogió las biopsias del hígado de tipo salvaje y ratones libres de gérmenes y utiliza la espectroscopia de resonancia magnética nuclear, o RMN, para aclarar la diferencia en el perfil metabólico hepático de las dos poblaciones de animales.

Por último, los inmunólogos a menudo realizan cosecha de tejido estéril para estudiar la propagación de la infección. En este experimento particular, investigadores realizaron inyección intratraqueal de la bacteria Pseudomonas aeruginosa para inducir la infección pulmonar crónica. A continuación, los animales fueron sacrificados y los pulmones fueron extraídos usando una técnica aséptica para determinar la carga bacteriana en 3, 7, 14 y 28 días post-infección.

te ' ve a Miró JoVE ' s video sobre recolección de tejidos procedentes de animales de laboratorio mediante una técnica aséptica. Ahora debería tener una mejor idea de los pasos que debe tomar para asegurarse de que la esterilidad se mantiene a través de la cosecha. Y debería poder extraer órganos abdominales y torácicos los cerebros de estos animales sin causar ningún daño al tejido. Como siempre, gracias por ver!

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter