Comience cortando la plántula de maíz envejecido deseada en el tejido mesocótilo con un cuchillo pequeño o un par de tijeras. Limpie la plántula con un pincel. Luego sostenga el pelacables con sus mandíbulas hacia el paracaídas.
Coloque el conducto en el orificio seleccionado y apriete los mangos de la peladora. Deslice el decapante lejos de la rampa para recortar la parte superior de las hojas. Use una regla para medir la longitud desde la punta del primordio hasta la base del tobogán.
Para comenzar la imagen de primordio de la hoja, mantenga la rampa firme sobre una superficie lisa bajo un microscopio estéreo con un aumento de aproximadamente 0.8x. Usando una cuchilla de afeitar o bisturí, haga un corte inicial ligeramente por encima de la región objetivo para descartar la porción distal del tobogán. Luego obtenga alrededor de 0.25 a 0.8 milímetros de secciones delgadas en los puntos deseados a lo largo del primordio.
Una vez hecho esto, monte la sección de la hoja en un portaobjetos de vidrio limpio. Aplicar unas gotas de agua directamente en la sección con una pipeta. Y coloque un deslizamiento de cubierta en la parte superior.
Aplique unas gotas más a través de los bordes del cubreobjetos si es necesario. Coloque el portaobjetos en la platina del microscopio de epifluorescencia y ajuste la configuración para visualizar el fluoróforo. Usando este método, el muestreo de resección casual se estandarizó midiendo los primordios antes de la sección.
Se descubrió una tendencia que mostraba que la borla dos que desaparecía tenía un primordia más ancho y más venas de lo normal, lo que indica que el defecto en el mutante comenzó temprano en el desarrollo de la hoja. Este método también permitió el examen sistemático de los patrones de expresión de la respuesta hormonal de los reporteros de proteínas fluorescentes en los primordios de la hoja.
Robil, J. M., Cortez, C. D. T., Villafuerte, C. M. R., Dela Peña, E. D. C., De Leon, D. O., Rioja, R. J. R., McSteen, P. Imaging Transverse Sections of Maize Leaf Primordia. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e200180, doi:10.3791/200180 (2023).