عزل وتطبيع الحمض النووي الذي يحتوي على بروتينات متشابكة

لبدء عزل وتطبيع البروتينات المتشابكة المحتوية على الحمض النووي ، قم باستنشاق الوسائط باستخدام ماصة شفط بعد الانتشار في كل مكان والعلاج الدوائي SUMOylation. شطف الخلايا مع برنامج تلفزيوني بارد الجليد قبل إضافة 600 ميكرولتر من كاشف DNAzol. حرك اللوحة ببطء على منصة اهتزازية لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية ، وأضف 0.3 ملليلتر من الإيثانول البارد 100٪ مباشرة إلى اللوحة.

كرر التحريض حتى يصبح ركام الحمض النووي غير الشفاف مرئيا. بعد ذلك ، قم بنقل تحلل الخلية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 ملليلتر وأجهزة طرد مركزي لمدة 15 دقيقة عند أربع درجات مئوية عند 20،000 جم ، وبعد استنشاق المادة الطافية ، اغسل الحمض النووي وحبيبات البروتين المتشابكة في ملليلتر واحد من الإيثانول بنسبة 75٪ ، تليها دقيقتان من الطرد المركزي عند 20،000 جم وأربع درجات مئوية. نضح المادة الطافية قبل الدوران لأسفل بنفس السرعة وإزالة السائل المتبقي باستخدام ماصة P-20.

جفف الحبيبات في الهواء لمدة خمس دقائق. قم بإذابة حبيبات الحمض النووي المجففة في 0.1 ملليلتر من الماء المقطر المزدوج عن طريق السحب لأعلى ولأسفل عدة مرات. ثم ، احتضان التعليق عند 37 درجة مئوية في حمام مائي لمدة 30 دقيقة حتى تتضخم الحبيبات ثلاث مرات على الأقل.

قم بتدوين العينات لمدة 10 ثوان باستخدام مسبار معالج بالموجات فوق الصوتية بسعة 30٪ وتحديد تركيز الحمض النووي باستخدام مطياف الأشعة المرئية وفوق البنفسجية. أضف الماء المقطر المزدوج لضبط تركيز الحمض النووي إلى 400 إلى 500 نانوجرام لكل ميكرولتر في 120 ميكرولتر. بعد ذلك ، انقل 20 ميكرولترا من العينة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد كتحكم في تحميل الحمض النووي غير المهضوم.

أضف 2،000 وحدة هلام من نوكلياز المكورات الدقيقة و 11 ميكرولتر من 10X عازلة تفاعل نوكلياز المكورات الدقيقة الكالسيوم إلى الحمض النووي ، المذاب في 100 ميكرولتر المتبقية من الماء المقطر المزدوج. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.