99 Views
•
02:29 min
•
August 04, 2023
DOI:
Transcript
Automatically generated
ابدأ بإعداد محطة عمل الأتمتة. قم بدمج جهاز إضاءة microplate ، مثل optoPlate ، الذي يسمح بالوصول المريح إلى ذراع قابض الروبوت. بعد ذلك ، قم بمعالجة جدول بيانات باستخدام البرنامج النصي MATLAB المتاح لبرمجة optoPlate.
قم بتنفيذ برنامج تحفيز الضوء عن طريق الوميض على لوحة البصر. لبرمجة الروبوت ، قم باستكشاف أي أخطاء محتملة وإصلاحها لضمان الأداء السليم لتعريفات الناقل و LabWare. قم بتشغيل لوحة فارغة من خلال حلقة البرنامج النصي عدة مرات للتحقق من قدرة ذراع قابض الروبوت على التقاط اللوحة ووضعها بدقة.
بعد ذلك ، حدد مستعمرات من اللوحات لإعداد لوحة العينة. ثم تلقيحها في ثلاثة ملليلتر من الوسائط الاصطناعية الكاملة في أنابيب الثقافة الزجاجية. احتضان هذه الثقافات بين عشية وضحاها عند 30 درجة مئوية على أسطوانة دوارة في الظلام.
في كوفيت ، تمييع 200 ميكرولتر من الثقافة في ملليلتر واحد من الوسط الكامل الاصطناعية. سجل كثافته البصرية باستخدام مقياس الطيف الضوئي. بعد ذلك ، قم بتخفيف كل ثقافة بين عشية وضحاها إلى كثافة بصرية تبلغ 0.1 في أنابيب الثقافة الزجاجية.
ماصة الثقافات المخففة في لوحة 96 بئرا. قم بتضمين الآبار ذات الوسائط الفارغة والخلايا غير الفلورية كعناصر تحكم سلبية. احتضان لوحة العينة في حاضنة شاكر عند 30 درجة مئوية لمدة خمس ساعات.
الآن ، ضع لوحة العينة على شاكر السخان. ابدأ البرنامج النصي للأتمتة بالنقر فوق تشغيل. بمجرد تسجيل القياس الأولي على قارئ اللوحة ، ابدأ برنامج تحفيز الضوء عن طريق تشغيل شريط الطاقة لجهاز الإضاءة.
أظهرت قيم التألق بمرور الوقت لسلالة بصرية وراثية أن المستوى الفلوري الكلي كان متناسبا مع دورة عمل التحفيز الضوئي. كانت قيم الكثافة الضوئية المقابلة متسقة ، مما يشير إلى أن النمو ظل غير متأثر بظروف الإضاءة المتغيرة. استخدمت سلالات بصرية وراثية مختلفة استجابات مختلفة لشدة نبضة الضوء والفترة وتغيرات دورة العمل.
Read Article
Cite this Article
Harmer, Z. P., McClean, M. N. Using Lustro for Automated High-Throughput Optogenetic Characterization of Yeast. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e200456, doi:10.3791/200456 (2023).
Copy