Iniezione ortotopica nel tampone grasso mammario: stabilire il cancro al seno nei topi

In primo luogo, stabilire la linea cellulare del cancro al seno desiderata in coltura. Il giorno prima dell'operazione, radere l'addome del topo e utilizzare la crema depilatoria per rimuovere la pelliccia ed esporre i capezzoli inguinali. Il giorno dell'operazione, raccogliere le cellule, anestetizzare il mouse e confermare una mancanza di risposta al dito del mouse. Usando le pinzette, pizzicare la pelle intorno al capezzolo per creare un tunnel sollevato.

Quindi, con la siringa delle cellule raccolte, perforare la pelle. L'ago dovrebbe seguire il tunnel fino a quando la punta si avvicina al capezzolo. Spostare delicatamente la punta dell'ago nel cuscinetto grasso mammario, appena sotto il capezzolo. Rimuovere le pinzette per formare una tenda per la pelle con l'ago e quindi iniettare lentamente le cellule.

Infine, ritrarre la siringa, facendo attenzione a non disturbare l'urto rotondo che circonda il capezzolo. Le cellule iniettate e i tumori successivi esprimono luciferasi e possono essere monitorati utilizzando l'imaging bioluminescente. Nel protocollo di esempio mostreremo l'istituzione del cancro al seno ortotopico murino. Il giorno prima dell'operazione, trattenere manualmente il mouse ricevente e ruotare il lato della pancia animale verso la pelliccia per essere rasato intorno ai quattro capezzoli.

Pulire la pelliccia con un sottile strato di crema depilatoria. Acqua distillata utilizzata per rimuovere la crema dopo 30-60 secondi. E asciugare il mouse con morbidi asciugamani di carta. Il giorno dell'operazione, diluire la sospensione delle cellule tumorali del seno murino a 2 x 10 fino alle 5 ° cellule per millilitro di concentrazione di PBS in un tubo di microcentrifugo sterile sul ghiaccio.

Prima di ogni iniezione, caricare una siringa millilitro dotata di un ago .45 per 16, con 50 microlitri di cellule per topo. E confermare una mancanza di risposta al dito del dito in ogni animale sedato. Applicare un unguento agli occhi degli animali e utilizzare le pinzette per tendere la pelle intorno al quarto capezzolo del primo topo per creare un tunnel da seguire per la siringa.

Tenere la siringa con la smussatura rivolta verso l'alto ed entrare per via sottocutanea nella pelle a cinque-10 millilitri dal capezzolo, seguendo il tunnel fino a quando la punta dell'ago raggiunge quasi il capezzolo. - L'uso di pinzette per tendere la pelle intorno al primo capezzolo crea un tunnel da seguire per la siringa. L'ago deve essere inserito tra le punte della pinzetta e dovrebbe salire, invece di deprimere nel tessuto. Spostare con cura la punta dell'ago nel cuscinetto grasso mammario fino a quando la smussatura è sotto il capezzolo.

E rilasciare la tenda della pelle per consentire una lenta iniezione delle cellule tumorali. - Al momento dell'inserimento, spostare attentamente la punta dell'ago nel cuscinetto grasso mammario fino a quando la smussatura è sotto il capezzolo e che si sente resistenza per garantire la consegna delle cellule nella posizione corretta. Quando tutte le cellule sono state iniettate, ruotare leggermente l'ago di lato e ritrarre lentamente la siringa. Utilizzare un batuffolo di cotone per applicare pressione sulla ferita dell'ago per 10-20 secondi, per assicurarsi che non vi siano infiltrazioni di liquidi.

Il capezzolo iniettato dovrebbe apparire come una sfera piatta bianca trasparente, con il capezzolo al centro