Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Cancer Research

A subscription to JoVE is required to view this content.

Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria

 
Click here for the English version

Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria: Establecimiento de cáncer de mama en ratones

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

En primer lugar, establecer la línea celular de cáncer de mama deseada en el cultivo. El día antes de la operación, afeita el abdomen del ratón y usa crema depilatoria para quitar el pelaje y exponer los pezones inguinales. El día de la operación, recoger las celdas, anestesiar el ratón y confirmar la falta de respuesta a la pellizco del dedo del pie. Usando pinzas, pellizcar la piel alrededor del pezón para crear un túnel elevado.

Luego, con la jeringa de las células recolectadas, perforar la piel. La aguja debe seguir el túnel hasta que la punta se acerque al pezón. Mueva suavemente la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria, justo debajo del pezón. Retire las pinzas para formar una tienda de campaña de la piel con la aguja y luego inyecte lentamente las células.

Por último, retraiga la jeringa, teniendo cuidado de no perturbar el golpe redondo que rodea el pezón. Las células inyectadas y los tumores posteriores expresan luciferasa y se pueden rastrear mediante imágenes bioluminiscentes. En el protocolo de ejemplo, mostraremos el establecimiento de cáncer de mama ortotópico murino. El día antes de la operación, sujeta manualmente el ratón receptor y gira el lado del vientre del animal hacia el pelaje para afeitarse alrededor de los cuartos pezones.

Limpie el pelaje con una fina capa de crema depilatoria. Se utiliza agua destilada para eliminar la crema después de 30 a 60 segundos. Y seque el ratón con toallas de papel suave. El día de la operación, diluya la suspensión celular de cáncer de mama murino a una 2 x 10 a 5ª célula por mililitro de concentración de PBS en un tubo de microcentrífuga estéril sobre hielo.

Antes de cada inyección, cargue una jeringa mililitro equipada con una aguja .45 por 16, con 50 microlitros de células por ratón. Y confirmar la falta de respuesta a la pellizco del dedo del pie en cada animal sedado. Aplicar ungüento a los ojos de los animales, y utilizar pinzas para tentar la piel alrededor del cuarto pezón del primer ratón para crear un túnel para la jeringa a seguir.

Sostenga la jeringa con el bisel orientado hacia arriba y entre subcutáneamente en la piel a cinco a 10 mililitros desde el pezón, siguiendo el túnel hasta que la punta de la aguja casi llegue al pezón. - El uso de pinzas para tentar la piel alrededor del primer pezón crea un túnel para que la jeringa siga. La aguja debe introducirse entre las puntas de las pinzas y debe subir, en lugar de deprimirse en el tejido. Mueva cuidadosamente la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria hasta que el bisel esté debajo del pezón.

Y libere la tienda de campaña de la piel para permitir una inyección lenta de las células cancerosas. - Al insertarse, mueva cuidadosamente la punta de la aguja hacia arriba en la almohadilla de grasa mamaria hasta que el bisel esté debajo del pezón, y que sienta resistencia para asegurar el suministro de las células a la ubicación correcta. Cuando se hayan inyectado todas las células, gire la aguja ligeramente hacia un lado y retraiga la jeringa lentamente. Utilice un hisopo de algodón para aplicar presión a la herida de la aguja durante 10 a 20 segundos, para asegurarse de que no haya filtración fluida.

El pezón inyectado debe aparecer como una esfera plana blanca transparente, con el pezón en el centro

Tags

Valor vacío Emisión
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter