Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
أولا، إنشاء خط خلايا سرطان الثدي المطلوب في الثقافة. في اليوم السابق للعملية، حلق بطن الفأر واستخدم كريم إزالة الشعر لإزالة الفراء وفضح الحلمات الأربية. في يوم العملية، وجمع الخلايا، تخدير الماوس وتأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم. باستخدام ملاقط، قرصة الجلد حول الحلمة لإنشاء نفق رفع.
ثم، مع حقنة من الخلايا التي تم جمعها، واخترق الجلد. يجب أن تتبع الإبرة النفق حتى يقترب الطرف من الحلمة. تحريك بلطف طرف الإبرة حتى في لوحة الدهون الثديي، فقط تحت الحلمة. إزالة ملاقط لتشكيل خيمة الجلد مع الإبرة ومن ثم حقن الخلايا ببطء.
وأخيرا، تراجع عن الحقنة، مع الحرص على عدم تعكير صفو عثرة الجولة المحيطة الحلمة. الخلايا المحقونة والأورام اللاحقة تعبر عن لوسيفيراز ويمكن تعقبها باستخدام التصوير الإنارة الحيوية. في بروتوكول المثال، وسوف نظهر إنشاء سرطان الثدي تقويم العظام مورين. في اليوم السابق للعملية، قم بتقييد الماوس المتلقي يدويا وحول جانب بطن الحيوان إلى الفراء ليتم حلقه حول الحلمات الرابعة.
مسح الفراء مع طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر. يستخدم الماء المقطر لإزالة الكريم بعد 30 إلى 60 ثانية. وتجفيف الماوس مع المناشف الورقية الناعمة. في يوم العملية، تمييع تعليق خلايا سرطان الثدي مورين إلى 2 × 10 إلى الخلايا 5 لكل ملليلتر من تركيز PBS في أنبوب الطرد المركزي الدقيق العقيم على الجليد.
قبل كل حقنة، قم بتحميل واحد، حقنة ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة 0.45 في 16، مع 50 ميكرولتر من الخلايا لكل فأر. وتأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع القدم في كل مخدر. تطبيق مرهم على عيون الحيوانات، واستخدام ملاقط لخيمة الجلد حول الحلمة الرابعة من الماوس الأول لإنشاء نفق للمحقنة لمتابعة.
عقد المحاقن مع شطبة تواجه صعودا وتحت الجلد أدخل الجلد في 5-10 ملليلتر من الحلمة، بعد النفق حتى طرف إبرة تصل تقريبا الحلمة. - استخدام ملاقط لخيمة الجلد حول الحلمة الأولى يخلق نفقا للمحقنة لمتابعة. وينبغي إدخال الإبرة بين نصائح ملاقط وينبغي ركوب، بدلا من الاكتئاب في الأنسجة. تحرك بعناية طرف الإبرة حتى في وسادة الدهون الثديي حتى شطبة تحت الحلمة.
والإفراج عن خيمة الجلد للسماح للحقن بطيئة من الخلايا السرطانية. - عند الإدراج، قم بتحريك طرف الإبرة بعناية إلى وسادة الدهون الثديية حتى تكون ال شطبة تحت الحلمة، وأنك تشعر بالمقاومة لضمان تسليم الخلايا إلى الموقع الصحيح. عندما يتم حقن جميع الخلايا، قم بتحويل الإبرة قليلا إلى الجانب وتراجع الحقنة ببطء. استخدام مسحة القطن لتطبيق الضغط على الجرح إبرة لمدة 10 إلى 20 ثانية، للتأكد من عدم وجود تسرب السوائل.
يجب أن تظهر الحلمة المحقونة كحقن كرة مسطحة بيضاء شفافة ، مع الحلمة في الوسط
