Injection orthotopique dans le tampon de graisse mammaire : établir le cancer du sein chez les souris

Tout d’abord, établir la lignée cellulaire du cancer du sein désirée dans la culture. La veille de l’opération, raser l’abdomen de la souris et utiliser de la crème depilatory pour enlever la fourrure et exposer les mamelons inguinaux. Le jour de l’opération, recueillir les cellules, anesthésier la souris et confirmer un manque de réponse à la pincement des pieds. À l’aide d’une pince à épiler, pincer la peau autour du mamelon pour créer un tunnel soulevé.

Puis, avec la seringue des cellules collectées, percer la peau. L’aiguille doit suivre le tunnel jusqu’à ce que la pointe s’approche du mamelon. Déplacez doucement la pointe de l’aiguille vers le haut dans la garniture de graisse mammaire, juste en dessous du mamelon. Retirer les pinces pour former une tente de peau avec l’aiguille, puis injecter lentement les cellules.

Enfin, rétractez la seringue, en prenant soin de ne pas perturber la bosse ronde entourant le mamelon. Les cellules injectées et les tumeurs subséquentes expriment la luciferase et peuvent être suivies à l’aide de l’imagerie bioluminescente. Dans le protocole d’exemple, nous montrerons l’établissement du cancer du sein orthotopique murine. La veille de l’opération, retenez manuellement la souris destinataire et tournez le côté ventre animal jusqu’à la fourrure pour qu’elle soit rasée autour des quatrièmes mamelons.

Essuyer la fourrure avec une fine couche de crème depilatory. Utilisé de l’eau distillée pour enlever la crème après 30 à 60 secondes. Et séchez la souris avec des serviettes en papier souple. Le jour de l’opération, diluer la suspension cellulaire du cancer du sein murine à un 2 x 10 à la 5e cellule par millilitre de concentration de PBS dans un tube stérile de microcentrifugeuse sur la glace.

Avant chaque injection, chargez une seringue d’un millilitre munie d’une aiguille de 0,45 par 16, avec 50 microlitres de cellules par souris. Et confirmer un manque de réponse au pincement des pieds chez chaque animal sous sedated. Appliquer de l’onguent sur les yeux des animaux, et utiliser des pinces à épiler pour tenter la peau autour du quatrième mamelon de la première souris pour créer un tunnel pour la seringue à suivre.

Tenez la seringue avec le biseau orienté vers le haut et entrez sous-cutanéement dans la peau à cinq à 10 millilitres du mamelon, en suivant le tunnel jusqu’à ce que la pointe de l’aiguille atteigne presque le mamelon. - L’utilisation de pinces à épiler pour la tente de la peau autour du premier mamelon crée un tunnel pour la seringue à suivre. L’aiguille doit être entrée entre les pointes de la pince à épiler et doit monter, au lieu de déprimer dans le tissu. Déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans la garniture de graisse mammaire jusqu’à ce que le biseau soit sous le mamelon.

Et relâchez la tente de la peau pour permettre une injection lente des cellules cancéreuses. - Lors de l’insertion, déplacez soigneusement la pointe de l’aiguille vers le haut dans la garniture mammaire de graisse jusqu’à ce que le biseau soit sous le mamelon, et que vous sentiez la résistance pour assurer la livraison des cellules à l’endroit correct. Lorsque toutes les cellules ont été injectées, tournez légèrement l’aiguille sur le côté et rétractez la seringue lentement. Utilisez un coton-tige pour appliquer une pression sur la plaie de l’aiguille pendant 10 à 20 secondes, pour vous assurer qu’il n’y a pas d’infiltration de liquide.

Le mamelon injecté doit apparaître comme une sphère blanche transparente plate, avec le mamelon au centre