Injeção Ortotópica na Almofada de Gordura Mamária: Estabelecendo o Câncer de Mama em Camundongos

Primeiro, estabelecer a linha de células cancerígenas de mama desejadas na cultura. Um dia antes da operação, raspe o abdômen do rato e use creme depilatório para remover a pele e expor os mamilos inguinais. No dia da operação, colete as células, anestesia o mouse e confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do pé. Usando pinças, belisque a pele ao redor do mamilo para criar um túnel erguido.

Então, com a seringa das células coletadas, fure a pele. A agulha deve seguir o túnel até que a ponta se aproxime do mamilo. Mova suavemente a ponta da agulha para dentro da almofada de gordura mamária, logo abaixo do mamilo. Remova a pinça para formar uma tenda de pele com a agulha e, em seguida, injete lentamente as células.

Por fim, retraia a seringa, tomando cuidado para não perturbar a lombada redonda ao redor do mamilo. Células injetadas e tumores subsequentes expressam luciferase e podem ser rastreados usando imagens bioluminescentes. No protocolo de exemplo, mostraremos o estabelecimento do câncer de mama ortotópico murine. No dia anterior à operação, contenha manualmente o rato receptor e vire o lado da barriga do animal até a pele para ser raspado ao redor dos quartos mamilos.

Limpe a pele com uma fina camada de creme depilatório. Água destilada usada para remover o creme após 30 a 60 segundos. E seque o rato com toalhas de papel macio. No dia da operação, diluir a suspensão da célula de câncer de mama murina a uma 2 x 10 para a 5ª células por mililitro de concentração de PBS em um tubo de microcentrifuge estéril no gelo.

Antes de cada injeção, carregue uma, uma seringa mililitro equipada com uma agulha .45 por 16, com 50 microliters de células por rato. E confirmar a falta de resposta para beliscar o dedo do dedo em cada animal sedado. Aplique pomada nos olhos dos animais, e use pinças para enrolar a pele ao redor do quarto mamilo do primeiro rato para criar um túnel para a seringa seguir.

Segure a seringa com o bisel voltado para cima e subcutâneo entre na pele a cinco a dez mililitros do mamilo, seguindo o túnel até que a ponta da agulha quase atinja o mamilo. - Usar pinças para enrolar a pele ao redor do primeiro mamilo cria um túnel para a seringa seguir. A agulha deve ser inserida entre as pontas da pinça e deve subir, em vez de deprimente no tecido. Mova cuidadosamente a ponta da agulha para dentro da almofada de gordura mamária até que o bisel esteja sob o mamilo.

E solte a tenda da pele para permitir uma injeção lenta das células cancerosas. - Após a inserção, mova cuidadosamente a ponta da agulha para cima na almofada de gordura mamária até que o bisel esteja sob o mamilo, e que você sinta resistência para garantir a entrega das células para o local correto. Quando todas as células tiverem sido injetadas, gire a agulha ligeiramente para o lado e retraia a seringa lentamente. Use um cotonete para aplicar pressão na ferida da agulha por 10 a 20 segundos, para ter certeza de que não há infiltração de fluido.

O mamilo injetado deve aparecer como uma esfera plana branca transparente, com o mamilo no centro