Ортопедические инъекции в молочной жира Pad: Создание рака молочной железы у мышей

Во-первых, установить желаемую линию раковых клеток молочной железы в культуре. За день до операции, побрить живот мыши и использовать крем для удаления меха и подвергать паховой соски. В день операции собирайте клетки, обезболивая мышь и подтверждайте отсутствие реакции на щепотку ноша. Используя пинцет, ущипнуть кожу вокруг соска, чтобы создать поднятый туннель.

Затем, со шприцем собранных клеток, проколоть кожу. Игла должна следовать по туннелю до тех пор, пока кончик не приблизит к соску. Аккуратно переместите кончик иглы вверх в молочную жировую площадку, чуть ниже соска. Удалите пинцет, чтобы сформировать палатку кожи с иглой, а затем медленно вводить клетки.

Наконец, втягивать шприц, заботясь, чтобы не беспокоить круглый удар окружающих сосок. Инъекционные клетки и последующие опухоли выражают люциферазу и могут быть отслеированы с помощью биолюминесцентных изображений. В примере протокола мы покажем установление муринового ортопедического рака молочной железы. За день до операции вручную удерживайте мышь-получателя и поверните живот животное вверх к меху, чтобы побриться вокруг четвертых сосков.

Протрите мех тонким слоем крема для депиля. Используется дистиллированной воды для удаления крема через 30 до 60 секунд. И высушите мышь мягкими бумажными полотенцами. В день операции разбавляют суспензию раковых клеток молочной железы мурина до 2 х 10 до 5 клеток на миллилитр концентрации PBS в стерильной микроцентрифугной трубке на льду.

Перед каждой инъекцией загрузите один, один миллилитровый шприц, оснащенный иглой 0,45 на 16, с 50 микролитров клеток на мышь. И подтвердить отсутствие реакции на щипать ногой в каждом поделенное животное. Нанесите мазь на глаза животных, и использовать пинцет, чтобы палатка кожи вокруг четвертого соска первой мыши, чтобы создать туннель для шприца следовать.

Держите шприц с скошенной лицом вверх и подкожно войти в кожу на 5 до 10 миллилитров от соска, после туннеля, пока кончик иглы почти достигает соска. - Использование пинцета, чтобы палатка кожи вокруг первого соска создает туннель для шприца следовать. Игла должна быть введена между кончиками пинцета и должны ездить вверх, а не удручает в ткани. Тщательно перемести иглу наконечник вверх в молочной жира площадку, пока скошен под сосок.

И отпустите палатку кожи, чтобы позволить медленно инъекции раковых клеток. - После вставки, осторожно переместить кончик иглы вверх в молочной жировой площадке, пока скошен не находится под соском, и что вы чувствуете сопротивление, чтобы обеспечить доставку клеток в нужное место. Когда все клетки были введены, поверните иглу немного в сторону и медленно втягивать шприц. Используйте ватный тампон, чтобы оказать давление на рану иглы в течение 10 до 20 секунд, чтобы убедиться, что нет просачивания жидкости.

Инъекционный сосок должен выглядеть как прозрачная белая плоская сфера, с соском в центре