Orthotopische injectie in het borstvetkussen: borstkanker bij muizen vaststellen

Stel eerst de gewenste borstkankercellijn in cultuur vast. Scheer de dag voor de operatie de buik van de muis en gebruik ontharingscrème om de vacht te verwijderen en de liesige tepels bloot te leggen. Verzamel op de dag van de operatie de cellen, verdoof de muis en bevestig een gebrek aan reactie op teenknijpen. Knijp met een pincet de huid rond de tepel om een opgetilde tunnel te creëren.

Doorboor vervolgens met de spuit van verzamelde cellen de huid. De naald moet de tunnel volgen totdat de punt dicht bij de tepel komt. Beweeg de naaldpunt voorzichtig omhoog in het borstvetkussen, net onder de tepel. Verwijder het pincet om een huidtent te vormen met de naald en injecteer vervolgens langzaam de cellen.

Trek ten slotte de spuit terug en zorg ervoor dat u de ronde bult rond de tepel niet verstoort. Geïnjecteerde cellen en daaropvolgende tumoren drukken luciferase uit en kunnen worden gevolgd met behulp van bioluminescente beeldvorming. In het voorbeeldprotocol laten we de totstandbrenging van muriene orthotopische borstkanker zien. Houd op de dag voor de operatie de ontvangende muis handmatig vast en draai de buikzijde van het dier naar de vacht om rond de vierde tepels te scheren.

Veeg de vacht af met een dun laagje ontharingscrème. Gebruikt gedestilleerd water om de crème na 30 tot 60 seconden te verwijderen. En droog de muis met zachte papieren handdoeken. Verdun op de dag van de operatie de suspensie van de muriene borstkankercel tot een 2 x 10 tot de 5e cel per milliliter PBS-concentratie in een steriele microcentrifugebuis op ijs.

Laad vóór elke injectie één, één milliliter spuit uitgerust met een .45 bij 16 naald, met 50 microliter cellen per muis. En bevestig een gebrek aan reactie op teenknijpen bij elk verdoofd dier. Breng zalf aan op de ogen van de dieren en gebruik een pincet om de huid rond de vierde tepel van de eerste muis te plaatsen om een tunnel te maken voor de spuit om te volgen.

Houd de spuit met de schuine kant naar boven gericht en onderhuids in de huid op vijf tot 10 milliliter van de tepel, na de tunnel totdat de naaldpunt bijna de tepel bereikt. - Door een pincet te gebruiken om de huid rond de eerste tepel te plaatsen, ontstaat er een tunnel voor de spuit om te volgen. De naald moet tussen de pincetpunten worden ingevoerd en moet omhoog rijden, in plaats van in het weefsel te drukken. Beweeg de naaldpunt voorzichtig omhoog in het borstvetkussen totdat de schuine kant zich onder de tepel bevindt.

En laat de huidtent los om een langzame injectie van de kankercellen mogelijk te maken. - Beweeg bij het inbrengen de naaldpunt voorzichtig omhoog in het borstvetkussen totdat de schuine kant onder de tepel zit en dat u weerstand voelt om ervoor te zorgen dat de cellen op de juiste plaats worden gebracht. Wanneer alle cellen zijn geïnjecteerd, draait u de naald iets naar de zijkant en trekt u de spuit langzaam in. Gebruik een wattenstaafje om gedurende 10 tot 20 seconden druk uit te oefenen op de naaldwond, om er zeker van te zijn dat er geen vloeistof doorsijpelt.

De geïnjecteerde tepel moet verschijnen als een transparante witte platte bol, met de tepel in het midden