Ortopisk injektion i Mammary Fat Pad: Etablering af brystkræft hos mus

Først skal du etablere den ønskede brystkræft celle linje i kulturen. Dagen før operationen skal du barbere musens underliv og bruge depilatory creme til at fjerne pelsen og udsætte lyskene brystvorter. På dagen for operationen skal du samle cellerne, bedøve musen og bekræfte en manglende reaktion på tåklem. Brug pincet, klemme huden omkring brystvorten for at skabe en opløftet tunnel.

Derefter, med sprøjten af indsamlede celler, gennembore huden. Nålen skal følge tunnelen, indtil spidsen kommer tæt på brystvorten. Flyt forsigtigt nålespidsen op i brystfedtpuden lige under brystvorten. Fjern pincet til at danne en hud telt med nålen og derefter langsomt injicere cellerne.

Til sidst skal du trække sprøjten tilbage og passe på ikke at forstyrre den runde bump omkring brystvorten. Injicerede celler og efterfølgende tumorer udtrykker luciferase og kan spores ved hjælp af bioluminescerende billeddannelse. I eksempelprotokollen vil vi vise etableringen af murin orthotopic brystkræft. Dagen før operationen skal du manuelt fastholde modtagermusen og dreje dyrets maveside op til pelsen for at blive barberet omkring de fjerde brystvorter.

Tør pelsen af med et tyndt lag depilatorisk creme. Brugt destilleret vand til at fjerne cremen efter 30 til 60 sekunder. Og tør musen med bløde papirhåndklæder. På dagen for operationen fortyndes den murin brystkræftcellesuspension til en 2 x 10 til 5. celler pr. milliliter PBS-koncentration i et sterilt mikrocentrifugerør på is.

Før hver injektion, indlæse en, en milliliter sprøjte udstyret med en 0,45 af 16 nål, med 50 mikroliter af celler pr mus. Og bekræft en mangel på reaktion på tåkleling i hvert bedøvet dyr. Påfør salve til dyrenes øjne, og brug pincet til telt huden omkring den fjerde brystvorte af den første mus til at skabe en tunnel for sprøjten til at følge.

Hold sprøjten med facet opad og subkutanly ind i huden på fem til 10 milliliter fra brystvorten, efter tunnelen, indtil nålen spidsen næsten når brystvorten. - Brug pincet til telt huden omkring den første brystvorte skaber en tunnel for sprøjten til at følge. Nålen skal indtastes mellem pincetspidserne og skal køre op i stedet for at trykke ind i vævet. Flyt forsigtigt nålespidsen op i brystfedtpuden, indtil facetten er under brystvorten.

Og slip hudteltet for at tillade en langsom injektion af kræftcellerne. - Ved indsættelse skal nålespidsen forsigtigt flyttes op i brystfedtpuden, indtil facetten er under brystvorten, og så du føler dig modstandsdygtig over for at sikre, at cellerne leveres til det korrekte sted. Når alle cellerne er blevet injiceret, skal du dreje nålen lidt til siden og trække sprøjten langsomt tilbage. Brug en vatpind til at lægge pres på nålesåret i 10 til 20 sekunder for at sikre, at der ikke er nogen flydende nedsivning.

Den injicerede brystvorte skal fremstå som en gennemsigtig hvid flad kugle, med brystvorten i midten