Drosofilia Condizionamento del corteggiamento: un metodo per testare l'apprendimento e la memoria nelle mosche

-In primo luogo, isolare singoli maschi ingenui, o nonmati, Drosophila melanogastor. Quindi, per condizionare i maschi, aggiungere una femmina che si è già accoppiata, e quindi non è ricettiva al corteggiamento. Il maschio mostra comportamenti tipici di corteggiamento come orientarsi verso di lei, seguirla, toccarla con una zampetta anteriore ed estendere e vibrare la sua ala per produrre la canzone di corteggiamento. Può anche tentare di leccare e accoppiarsi. Indipendentemente dagli sforzi, la femmina rimane non ricettiva e il maschio sperimenta un rifiuto. Così, impara a non corteggiare una femmina precedentemente accoppiata.

Per testare la memoria del maschio, permettergli di riposare, per poi esporlo a un'altra femmina accoppiata. Il maschio addestrato non tenterà di corteggiare questa mosca perché conserva la memoria del rifiuto passato. Nel protocollo di esempio vedremo come vengono gestite le mosche durante le fasi di allenamento e test di un test di condizionamento del corteggiamento per la valutazione della memoria a breve e lungo termine.

- Iniziare anestetizzando tutti gli adulti dai file di accoppiamento di quattro giorni. Separare i sessi e trasferire singole femmine premated in ciascuno dei 12 pozzi di una fila di un blocco abitativo. Quindi, utilizzando un aspiratore e senza anestesia, rimuovere i maschi ingenui dai loro pozzi di casa e trasferirli nei pozzi contenenti le femmine premated. Ripetere questo processo in seconda fila per impostare altre 12 coppie.

Per testare l'apprendimento o la memoria a breve termine, eseguire questa configurazione all'alba e lasciare che il periodo di allenamento termini per un'ora. Per testare la memoria a lungo termine, impostare le coppie quattro ore prima dell'alba soggettiva e lasciare che l'allenamento si proiegua per otto ore.

- Affinché l'apprendimento e la memoria siano stabiliti, è importante che i maschi non riescano a copulare, quindi controlla periodicamente le coppie durante il periodo di allenamento, per assicurarsi che i maschi vengano respinti.

Al termine del periodo di allenamento, rimuovere delicatamente i maschi dai pozzi utilizzando un aspiratore, non l'anestesia di anidride carbonica. Caricare i maschi in un nuovo blocco abitativo. Per l'esperimento di apprendimento, testare immediatamente i maschi dopo l'allenamento, senza un periodo di riposo. Per l'esperimento di memoria a breve termine, consentire ai maschi un'ora di riposo prima di iniziare la fase di test. Per l'esperimento di memoria a lungo termine, riposare i maschi fino alla successiva alba soggettiva.

Per prepararsi alla fase di test dell'esperimento, anestetizza le femmine premated e trasferiscile in un nuovo normale vile alimentare. Consentire almeno un'ora affinché le mosche si riprendano dall'anestesia. Successivamente, preparate la configurazione dei test. Assicuratevi di avere i videoregistratori pronti a registrare l'attività nelle arene di corteggiamento.

Per iniziare il test, usa una delicata aspirazione per trasferire un maschio di prova dal blocco abitativo all'arena del corteggiamento con i divisori chiusi. Spostate i fori di ingresso tra le arene fino a quando tutte le 18 arene sono caricate con singoli maschi. Quindi, utilizzando la stessa tecnica, spostate le singole femmine premated in ciascuna delle 18 arene, ma sul lato opposto dei divisori. Ora capovolgete attentamente l'arena del corteggiamento e posizionatela sotto la videocamera con le aperture dei pozzi verso la superficie della panca bianca. Quindi, rimuovete i divisori e iniziate la registrazione video. Registrare almeno 10 minuti di attività. Al fine dell'esperimento, rimuovere le mosche dalle arene usando un vuoto e ventilare le camere di corteggiamento per almeno 10 minuti prima che siano riutilizzate.