دروسوفيلا التجشؤ وا المقايسة النفقية: طريقة لتقييم نقص الأكسجين في الأنسجة في يرقات الذباب

- لإعداد قفص جمع الأجنة، واستخدام لوحات عصير العنب أجار تستكمل مع عجينة الخميرة الطازجة ووضع لوحات على أقفاص تحتوي على الذباب Drosophila الذكور والإناث من النمط الجيني المناسب. الرائحة من الخميرة وعصير العنب جذابة وتعزز وضع البيض من قبل الإناث. تم قطع لوحة ومليئة معجون الخميرة.

يجب أن تتغذى اليرقات الصغيرة لزيادة وزن الجسم لتطويرها ، لذلك تحفر في مصدر الغذاء ، ومعجون الخميرة.

- إعداد الصلبان الوراثية التحكم والتجريبية في أطباق وضع البيض كما هو موضح في البروتوكول النصي. حافظ على الذباب في الظلام لمدة يومين على الأقل قبل بدء مجموعات البيض الموقورة.

بعد ذلك ، احتضان لوحات التجميع لمدة أربع ساعات بين عشية وضحاها عند 25 درجة مئوية.

لتشغيل واحد من المقايسة، وإعداد ما لا يقل عن خمس لوحات المقايسة لكل مجموعة تجريبية. إضافة 16 غراما من أجار يطير في 700 ملليلتر من الماء deionized عن طريق التدفئة. سخني محلول أجار حتى يذوب بالكامل تقريبا. ثم أضيفي محلول Nipagen إلى محلول أجار وحرارة حتى يذوب أجار تماما.

يجب أن يكون أغار الشفاء ثابتا للمس ومقاومة الانهيار عندما يتم قطع القطع منه.

لنقل اليرقات إلى لوحة المقايسة ، قم بعمل أداة بسيطة. ثني منحنى في طرف ميكروسباتولا بلاستيكية وتراجع الطرف في عجينة الخميرة لجعلها لاصقة لليرقات.

لضمان إعادة التكاثر بين تكرارات المقايسة ، من الأهمية بمكان أن يتم وضع 10 يرقات فقط على كل لوحة مقايسة. تأكد من التحقق من لوحة الفحص بعناية لتحديد أن يرقة واحدة وواحدة فقط يتم نقلها في كل مرة تقوم فيها بتسليم يرقة بطرف ميكروسباتولا.

بمجرد تحميل اللوحة، تسمية ذلك، وتغطيته، ثم وضعه في الظلام مع الجانب غطاء حتى في درجة حرارة الغرفة. فحص كل لوحة يوميا حتى ماتت جميع اليرقات أو pupated. وهنا أمثلة من لوحات لسلالة نوع البرية من اليوم الثاني حتى اليوم الثامن من المقايسة. في اليوم الثاني، يتم دفن اليرقات في الغذاء ولا يحدث نفق. نفق يبدأ في اليوم الثالث وتصل إلى الحد الأقصى بين خمسة وثمانية كما تتوقف اليرقات يهيمون على وجوههم و pupate في أنفاقها.

نقل بعناية الخوخ مع إبرة إغاظة عازمة إلى لوحة العنب وإذا رغبت في ذلك، عد كم عدد الخوخ eclose. يحيط علما تشكيل الخوادر وتقييم الخوادر للتشوهات.