Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 要建立胚胎收集笼,使用葡萄汁阿加板补充新鲜酵母糊,并将板放在笼子里含有适当的基因型的雄性和雌性果蝇。酵母和葡萄汁的气味很吸引人,促进雌性产卵。允许在计时期间产卵。然后取出成人并孵育胚胎盘24小时,以获得第一个星内幼虫。 然后轻轻地将几个单独的幼虫从葡萄汁盘转移到一个只有阿加的测试板上,其中在阿加的中心有一个洞板被切出,并充满了酵母糊。
幼虫必须喂养才能增加体重才能发育, 所以他们在食物来源,酵母糊中挖洞。 随着它们的发展,幼虫进入一个游荡阶段,并从食物中挖隧道,寻找幼崽的部位。要评估缺氧,请检查基底中的隧道模式幼虫形态。缺乏或不足的隧道是缺氧的征兆。 在示例协议中,我们将看到如何设置挖洞和隧道检测。
-设置控制和实验遗传十字架在蛋下菜,如文本协议所述。在开始定时收集鸡蛋之前,让苍蝇在黑暗中至少两天。 对于定时鸡蛋收集,将成人转移到新的葡萄醋板装饰与酵母膏的新鲜抹布在一天早些时候,并允许成人在盘子上产卵四个小时。四小时后,将成人转移到新鲜的葡萄糖盘。
接下来,在25摄氏度的温度下连夜孵化4小时的采集板。到第二天下午,大部分幼虫将孵化出来。计划每个实验组至少有50个。
对于单次运行的检测,每个实验组至少准备五个检测板。通过加热在700毫升的除离子水中加入16克飞阿加。准备17.5毫升尼帕肯在95%乙醇。 加热阿加溶液,直到它几乎完全溶解。 然后将尼帕根溶液添加到阿加溶液中,加热至阿加完全溶解。 短暂冷却 agar 溶液,然后用 15 毫升的 agar 溶液加载 10 厘米板。一旦凝胶,在盘子上盖上盖子,让它们在室温下干燥几个小时或过夜。
固化的阿加必须坚定地触摸和抵抗崩溃时,碎片被切出它。一旦阿加已经固化,使用1.5厘米的软木孔,使每个盘子的凝胶中一个中心孔。然后用新鲜的酵母酱整齐地填充孔。
要将幼虫转移到检测板,制作一个简单的工具。将曲线弯曲到塑料微铲尖端,将尖端浸入酵母糊中,使其粘合到幼虫中。现在单独拿起第一个星内幼虫,并把它们放在靠近食物土堆的阿加板块上。对于每个实验组,准备至少五个板,每个有10个幼虫。
为了确保检测复制品之间的可重复性,在每个检测板上只放置10个幼虫至关重要。一定要仔细检查检测板,以确定每次交付带有微肩尖的幼虫时,只有一只幼虫被转移。
装好盘子后标记它, 盖上它, 然后把它放在黑暗中, 盖子侧面在室温下。 每天检查每个盘子,直到所有的幼虫都死亡或幼崽死亡。 以下是从第二天到第八天的野生菌株板的例子。第二天,幼虫被埋在食物中,没有隧道发生。 隧道从第三天开始,到第五天到第八天达到最大值,因为幼虫不再在隧道中游荡和幼崽。
小心地用弯曲的调戏针将幼崽转移到葡萄盘上,如果需要的话,数数多少幼仔。注意幼崽的形成,并评估幼崽的异常情况。