ड्रोसोफिला बिलिंग और सुरंग परख: फ्लाई लार्वा में ऊतक हाइपोक्सिया का आकलन करने की एक विधि

- भ्रूण संग्रह पिंजरे स्थापित करने के लिए, ताजा खमीर पेस्ट के साथ पूरक अंगूर का रस आगर प्लेटों का उपयोग करें और उचित जीनोटाइप के पुरुष और महिला ड्रोसोफिला मक्खियों वाले पिंजरों पर प्लेटें रखें। खमीर और अंगूर के रस से गंध आकर्षक है और मादाओं द्वारा अंडे बिछाने को बढ़ावा देती है। अंडे को समय पर बिछाने की अनुमति दें। फिर वयस्कों को हटा दें और भ्रूण प्लेटों को 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें ताकि पहले इंस्टार लार्वा प्राप्त किया जा सके। फिर अंगूर के रस की प्लेट से कुछ व्यक्तिगत लार्वा को एक आगर-केवल परीक्षण प्लेट में स्थानांतरित करें जहां आगर में एक छेद थाली को काटकर खमीर पेस्ट से भरा गया था।

युवा लार्वा को विकसित करने के लिए शरीर के वजन को हासिल करने के लिए खिलाना चाहिए, इसलिए वे खाद्य स्रोत, खमीर पेस्ट में बिल करते हैं । जैसे ही वे विकसित होते हैं, लार्वा एक भटकते हुए चरण में प्रवेश करते हैं और पिल्ला के लिए एक साइट की तलाश करने के लिए भोजन से दूर सुरंग बनाते हैं । हाइपोक्सिया का आकलन करने के लिए, सब्सट्रेट में सुरंग पैटर्न लार्वा फार्म की जांच करना । कमी या अपर्याप्त सुरंग ऑक्सीजन अभाव का संकेत है । उदाहरण प्रोटोकॉल में, हम देखेंगे कि कैसे burrowing और सुरंग के रूप में स्थापित करने के लिए

- अंडे में नियंत्रण और प्रयोगात्मक आनुवंशिक क्रॉस स्थापित करें पाठ प्रोटोकॉल में वर्णित व्यंजन रखें। समय पर अंडा संग्रह शुरू करने से पहले कम से कम दो दिन तक मक्खियों को अंधेरे में रखें। समय पर अंडे के संग्रह के लिए, वयस्कों को नए अंगूर आगर प्लेटों में स्थानांतरित करें जो दिन में जल्दी खमीर पेस्ट के एक ताजा धब्बा से सजाए गए हैं और वयस्कों को चार घंटे तक प्लेटों पर अंडे रखने की अनुमति देते हैं। चार घंटे के बाद, वयस्कों को ताजा अंगूर की प्लेटों में स्थानांतरित करें।

इसके बाद, चार घंटे की संग्रह प्लेटों को रात भर 25 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें । अगली दोपहर तक अधिकांश लार्वा रची जाएंगी । प्रत्येक प्रायोगिक समूह के लिए कम से ५० की योजना है ।

परख के एक रन के लिए प्रति प्रायोगिक समूह में कम से कम पांच परख प्लेट तैयार करें। 700 मिलीलीटर डिओनाइज्ड वाटर में 16 ग्राम फ्लाई एगर को गर्म करके डालें। 95% इथेनॉल में 17.5 मिलीलीटर निपेजन तैयार करें। अगर जैल लगभग पूरी तरह से भंग हो जाए तब तक आगर के घोल को गर्म करें। फिर आगर के घोल में निपेजन घोल डालें और गर्मी पूरी तरह से घुल जाए। अगर के घोल को संक्षेप में ठंडा करें, फिर आगर के घोल के 15 मिलीलीटर के साथ 10 सेंटीमीटर प्लेट लोड करें। एक बार अगर जैल, प्लेटों पर ढक्कन लगाएं और उन्हें कमरे के तापमान पर कुछ घंटों या रात भर के लिए सूखने दें।

ठीक आगर को स्पर्श करने के लिए दृढ़ होना चाहिए और जब टुकड़े काट दिए जाते हैं तो टूटने का विरोध करना चाहिए। एक बार अगर ठीक हो जाने के बाद, प्रत्येक प्लेट में आगर जेल में एक केंद्रीय छेद बनाने के लिए 1.5 सेंटीमीटर कॉर्क बोरर का उपयोग करें। फिर छेद को ताजा खमीर पेस्ट से बड़े करीने से भर दें।

लार्वा को परख प्लेट में स्थानांतरित करने के लिए, एक साधारण उपकरण बनाएं। एक वक्र को प्लास्टिक माइक्रोस्पाटुला की नोक में मोड़ें और खमीर पेस्ट में टिप को डुबोकर लार्वा के प्रति चिपकने वाले बनाएं। अब पहले इंस्टार लार्वा को व्यक्तिगत रूप से उठाएं और उन्हें भोजन के टीले के करीब आगर प्लेट पर रखें। प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह के लिए, 10 लार्वा के साथ कम से कम पांच प्लेट तैयार करें।

परख की प्रतिकृति के बीच प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक परख प्लेट पर केवल 10 लार्वा रखे जाते हैं। यह निर्धारित करने के लिए परख प्लेट को ध्यान से जांचना सुनिश्चित करें कि हर बार जब आप माइक्रोस्पातुला टिप के साथ लार्वा वितरित करते हैं तो एक और केवल एक लार्वा स्थानांतरित किया जाता है।

एक बार थाली लोड हो जाने के बाद उसे लेबल लगा दें, ढक लें, फिर उसे अंधेरे में ढक्कन के साथ कमरे के तापमान पर रखें। हर प्लेट की रोजाना जांच करें जब तक कि सभी लार्वा मर न जाएं या पिल्ले न हो जाएं । यहां दो दिन से एक जंगली प्रकार के तनाव के लिए प्लेटों के उदाहरण है परख के आठ दिन के माध्यम से । दो दिन, लार्वा भोजन में दफन कर रहे है और कोई सुरंग होने । सुरंग तीन दिन शुरू होती है और पांच और आठ दिनों के बीच अधिकतम तक पहुंचती है क्योंकि लार्वा भटकना और उनकी सुरंग में फैलता है ।

एक तुला चिढ़ा सुई के साथ पिल्ला को ध्यान से अंगूर की प्लेट में स्थानांतरित करें और यदि वांछित हो, तो गिनें कि कितने प्यूप eclose। pupae गठन पर ध्यान दें और असामान्यताओं के लिए pupae का मूल्यांकन करें।