드로소필라 잠복 및 터널링 분석: 플라이 애벌레에서 조직 저산소증을 평가하는 방법

- 배아 수집 케이지를 설정하려면 신선한 효모 페이스트로 보충 된 포도 주스 한천 판을 사용하고 적절한 유전자형의 수컷과 암컷 Drosophila 파리가 들어있는 케이지에 접시를 놓습니다. 효모와 포도 주스의 냄새가 매력적이고 암컷에 의한 계란 누워를 촉진합니다. 접시를 잘라 효모 페이스트로 채워졌습니다.

젊은 애벌레는 개발하기 위해 체중을 얻기 위해 사료해야합니다, 그래서 그들은 음식 소스에 잠복, 효모 페이스트. 그들은 개발로, 애벌레는 새끼를위한 사이트를 찾기 위해 음식에서 방황 단계와 터널을 입력합니다. 저산소증을 평가하기 위해, 기판에서 터널링 패턴 애벌레 형태를 검사.

- 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 계란 평신기의 제어 및 실험적 유전 적 십자가를 설정합니다.

다음으로, 4시간 짜리 수집판을 섭씨 25도에서 하룻밤 동안 배양합니다. 다음 날 오후까지 대부분의 유충이 부화될 것입니다.

분석의 한 번 실행, 실험 그룹 당 적어도 5 개의 분석 플레이트를 준비. 가열하여 탈이온 화 된 물의 700 밀리리터에 플라이 한천 16 그램을 추가합니다. 17.5 밀리리터 니페이언을 95% 에탄올로 준비하십시오.

경화 한천은 조각을 잘라 때 터치에 단단히 하고 무너져 저항해야합니다. 한천이 경화되면, 각 접시에 있는 한천 젤의 중앙 구멍을 만들기 위해 1.5 센티미터 코르크 보어를 사용합니다.

애벌레를 분석 판으로 옮기려면 간단한 도구를 만듭니다.

분석 복제 사이의 재현성을 보장하기 위해 각 분석 판에 10 개의 애벌레만 배치하는 것이 중요합니다.

접시가 로드되면 라벨을 붙입니다. 그것을 덮고, 실온에서 뚜껑 쪽을 올려 어둠 속에 놓습니다. 모든 애벌레가 죽거나 새끼를 먹을 때까지 매일 각 접시를 검사하십시오.

구부러진 놀리는 바늘로 강아지를 조심스럽게 포도 판에 옮기고 원하는 경우, 얼마나 많은 강아지를 가까이에 세십시오.