Drosophila Larva Imaginal Disc Disseksjon: En metode for å observere utvikling av Epithelia

- For å starte disseksjonen, bruk deretter ett par tang for å gripe larvekroppen i midten, og et annet par for å rive larven i to. Deretter klemmer du munnkroken i den fremre enden mens du holder kroppen på bakre side. Deretter skyver du tangene som holder munnen inne i kroppen. Bruk de bakre tangene til å brette kroppsveggen innvendig ut.

I dette preparatet kan spyttkjertlene og tarmen lett identifiseres og fjernes for å avsløre hjernen og imaginale plater. Antennene, øyet, benet, vingen og haltereskivene kan ses. Når de er fikset, overfør larvalpreparatet til et lysbilde med monteringsmedium der platene kan dissekeres ytterligere. I eksempelprotokollen vil vi se hvordan du dissekerer vingemaginale plater ved hjelp av denne larvalpreparatet.

- Til å begynne med, bruk en trepinne eller stumpe tang for å overføre vandrende tredje instar larver til en Petri-tallerken med PBS. Deretter genotype dem under fluorescerende lys for å identifisere de riktige fluorescerende markørene for mosaikk larver. Før du fortsetter, vask larvene med PBS. Deretter under et disseksjonsmikroskop, bruk to par tang for å klemme midten av larven, og rive kroppen i to. Deretter klemmer du munnkrokene mens du skyver munnen mot kroppen for å slå kroppen ut. Deretter fjerner unødvendige materialer, for eksempel spyttkjertlene og fettlegemene. Larvene er nå forberedt på å vende kroppen ut. antistofffarging, som er beskrevet i tekstprotokollen.

Overfør de fargede vevspreparatene til et mikroskopsklie ved hjelp av en to milliliter plastoverføringspipette. Deretter bruker du tang, flytter individuelle larver til dråper monteringsmedium på et mikroskopsklie. Nå bruker du tang, isolerer imaginale plater. Begynn med å holde enden av dissekert vev og trekke bort hjernen og øyeantenneskivene med de andre tangene.

Nå finner du vingen imaginale plater. Vingen imaginale plater sitter fast på sidesiden av dissekert vev. Deretter fester du vevet med en tang, og skrap forsiktig av vingeskivene. Plasser deretter hjernen nær vingeskivene for å beskytte dem mot å bli knust av dekslene. Nå forsiktig dekke strukturene med en dekselglidning, og forsegle dekslene med neglelakk.