Drosophila Larva Imaginal Disk Diseksiyonu: Gelişen Epitelleri Gözlemlemek İçin Bir Yöntem

- Diseksiyona başlamak için, ortadaki larva gövdesini kavramak için bir çift, larvayı ikiye bölecek ikinci bir çift kullanın. Sonra vücudu arka tarafta tutarken ön uçtaki ağız kancasını kıstırın. Sonra, ağzı vücudun içine tutan tokmakları itin. Vücut duvarını dışarı katlamak için arkadaki tokmakları kullanın.

Bu hazırlıkta, tükürük bezleri ve bağırsak, beyin ve hayal disklerini ortaya çıkarmak için kolayca tanımlanabilir ve çıkarılabilir. Anten, göz, bacak, kanat ve halter diskleri görülebilir. Sabitlendikten sonra, larva preparatını disklerin daha fazla parçalanabileceği montaj ortamına sahip bir slayda aktarın. Örnek protokolde, bu larva preparatını kullanarak kanat hayal disklerinin nasıl inceleceğini göreceğiz.

- Başlamak için, dolaşan üçüncü instar larvaları PBS'li bir Petri kabına aktarmak için ahşap bir çubuk veya künt forseps kullanın. Devam etmeden önce, larvaları PBS ile yıkayın. Daha sonra bir diseksiyon mikroskobu altında, larvaların merkezini çimdiklemek için iki çift forseps kullanın ve vücudu ikiye bölün. Sonra, vücudu ters çevirmek için ağzı vücuda doğru iterken ağız kancalarını kıstırın. Sonra tükürük bezleri ve yağ kütleleri gibi gereksiz malzemeleri çıkarın. Larvalar artık hazırlandı. metin protokolünde ayrıntılı olarak açıklanan fiksasyon ve antikor lekelenmesi.

Lekeli doku preparatlarını iki mililitre plastik transfer pipet kullanarak mikroskop kaydırağı ile bir mikroskop kaydırağı aktarın. Daha sonra forseps kullanarak, bireysel larvaları bir mikroskop kaydırağı üzerinde montaj ortamının damlalarına taşıyın. Şimdi forseps kullanarak, hayal disklerini izole edin. Parçalanmış dokunun ucunun basılı tutulması ve diğer forsepslerle beyin ve göz anten disklerinin çekilmesi ile başlayın.

Şimdi kanat hayal disklerini bulun. Kanat imaginal diskleri parçalanmış dokunun yanal tarafına yapışmıştır. Sonra, dokuyu bir forseple sabitleyin ve kanat disklerini hafifçe çizin. Sonra beyinleri kapak kapağı tarafından ezilmelerini korumak için kanat disklerinin yanına yerleştirin. Şimdi yapıları bir kapak kayması ile hafifçe örtün ve kapağı oje ile kapatın.