Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Под микроскопом вскрытия и в сыворотке крови дополнены средства массовой информации, удалить репродуктивный тракт с каждой мухи с типсами. Во-первых, удалить части пищеварительного тракта, которые, возможно, сопровождали репродуктивного тракта.
Чтобы подвергнуть клетки внутри желез раствору диссоциации, удерживайте центр каждой железы типсами и нарезать через железу парой острых типсов. Удалите проксимальную часть железы и эякуляционный проток, чтобы оставить после себя дистальный конец желез, содержащих редкую вторичную популяцию клеток, ответственных за секрецию белков, участвующих в спаривании. Наконец, перенесите кончики аксессуаров в микро центрифугу трубки в рамках подготовки к пищеварению. В следующем протоколе мы рассекем аксессуарные железы, чтобы изолировать вторичные клетки для анализа транскриптома.
- Перед началом процедуры, вырезать и пламя круглый, широкий 200 микролитер советы для обработки желез, и пройти кончик открытия нескольких 1000 микролитер советы возле пламени менее чем за одну секунду, чтобы сузить отверстия. Затем, сортировать измененные советы от более узких до более широких на основе их скорости устремления. Для вскрытия вспомогательных желез, место от 20 до 25 мужчин дрозофилы в стеклянной тарелке на льду и использовать типсы и рассечение микроскоп для удаления репродуктивного тракта одного самца мухи.
Очисти пару аксессуаров от всех других тканей, в том числе яички и эякуляционные лампы, и передать аксессуар желез на стеклянную пластину, содержащую сыворотку дополняется среды при комнатной температуре. Когда 20 пар аксессуаров железы были собраны, мыть железы в блюдо PBS в течение одной-двух минут при комнатной температуре. В конце мытья, передача желез свежеприготовленное раствор диссоциации, и использовать острые щипцы под микроскопом.
Используя вторую пару типсов, вырежьте ткань острым кончиком, чтобы отделить проксимальную область соединительной железы и эякуляционный проток от части железы, содержащей вторичные клетки. Затем используйте предварительно влажное пламя, округленное широким 200 микролитровым кончиком пипетки для переноса желез в 1,5 миллилитровую трубку.
