Encyclopedia of Experiments: Biology
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- एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत और सीरम पूरक मीडिया में, प्रत्येक फ्लाई से प्रजनन पथ को संदंश के साथ हटा दें। सबसे पहले, प्रजनन पथ के साथ हो सकता है कि पाचन तंत्र के कुछ हिस्सों को हटा दें। गौण ग्रंथियों और स्खलन वाहिनी को अलग करने के लिए, टेस्ट, स्खलन बल्ब और टर्मिनलिया को हटा दें। सर्ज को हटाने के लिए पीबीएस में एक से दो मिनट के लिए ऊतक को धोएं।
ग्रंथियों के अंदर कोशिकाओं को वियोजन समाधान के लिए बेनकाब करने के लिए, प्रत्येक ग्रंथि के केंद्र को संदंश के साथ पकड़ें और ग्रंथि के माध्यम से तेज संदंश की एक जोड़ी के साथ टुकड़ा करें। ग्रंथि के समीपस्थ भाग और स्खलन वाहिनी को हटा दें, जिसमें संभोग में शामिल प्रोटीन को स्रावित करने के लिए उत्तरदायी दुर्लभ माध्यमिक कोशिका आबादी वाली ग्रंथियों के डिस्टल एंड को पीछे छोड़ दें । अंत में, पाचन की तैयारी में एक माइक्रो अपकेंद्रित्र ट्यूब के लिए गौण ग्रंथि युक्तियों को स्थानांतरित करें । निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम ट्रांस्टोम विश्लेषण के लिए माध्यमिक कोशिकाओं को अलग करने के लिए गौण ग्रंथियों को विच्छेदन करेंगे ।
- प्रक्रिया शुरू करने से पहले, कट और लौ दौर, ग्रंथियों से निपटने के लिए व्यापक 200 माइक्रोलीटर सुझाव, और एक सेकंड से भी कम समय के लिए एक लौ के पास कई १००० माइक्रोलीटर युक्तियों के टिप खोलने के लिए उद्घाटन संकीर्ण गुजरती हैं । फिर, अपनी आकांक्षा की गति के आधार पर संकरा से व्यापक करने के लिए संशोधित युक्तियों को सॉर्ट करें । गौण ग्रंथि विच्छेदन के लिए, बर्फ पर एक गिलास पकवान में 20 से 25 पुरुष ड्रोसोफिला रखें और एक पुरुष मक्खी के प्रजनन पथ को हटाने के लिए बल और एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप का उपयोग करें ।
टेस्ट और स्खलन बल्ब सहित अन्य सभी ऊतकों से सहायक ग्रंथि जोड़ी को साफ़ करें, और गौण ग्रंथियों को कमरे के तापमान पर सीरम पूरक माध्यम वाली कांच की प्लेट में स्थानांतरित करें। जब 20 जोड़ी गौण ग्रंथियां एकत्र की गई हों, तो पीबीएस के एक पकवान में ग्रंथियों को कमरे के तापमान पर एक से दो मिनट के लिए धोएं। धोने के अंत में, ग्रंथियों को ताजा तैयार वियोजन समाधान में स्थानांतरित करें, और एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे तेज बलदेपों का उपयोग करें ताकि एक ग्रंथि के मध्य को मजबूती से चुटकी ली जा सके।
संदंश की एक दूसरी जोड़ी का उपयोग करके, गौण ग्रंथि के समीपस्थ क्षेत्र और माध्यमिक कोशिकाओं वाले ग्रंथि के हिस्से से स्खलन वाहिनी को अलग करने के लिए तेज टिप के साथ ऊतक को काटें। इसके बाद, ग्रंथियों को 1.5 मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करने के लिए पूर्व-गीली लौ का उपयोग करें।
