Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Under et disseksjonsmikroskop og i serumsupplerte medier, fjern reproduksjonskanalen fra hver flue med tang. Fjern først deler av fordøyelseskanalen som kan ha ledsaget reproduksjonskanalen. For å isolere tilbehørskjertlene og ejakularkanalen, fjern testiklene, ejakulasjonspæren og terminalia. Vask vevet i ett til to minutter i PBS for å fjerne serumet. Deretter overfører du det til dissosiasjonsløsning.
For å eksponere cellene inne i kjertlene til dissosiasjonsløsningen, hold midten av hver kjertel med tang og skjær gjennom kjertelen med et par skarpe tang. Fjern den proksimale delen av kjertelen og ejakulatorisk kanal for å etterlate den distale enden av kjertlene som inneholder den sjeldne sekundære cellepopulasjonen som er ansvarlig for å utskille proteiner involvert i parring. Til slutt overfører du tilbehørstjertelspissene til et mikrosentrifugerør som forberedelse til fordøyelsen.
- Før du begynner prosedyren, kutt og flamme rundt, brede 200 mikroliterspisser for håndtering av kjertlene, og passerer tuppåpningen av flere 1000 mikroliterspisser i nærheten av en flamme i mindre enn ett sekund for å begrense åpningene. Deretter sorterer du de modifiserte spissene fra smalere til bredere basert på deres aspirasjonshastighet. For tilbehørskjertel disseksjon, plasser 20 til 25 mannlige drosophila i en glassfat på is og bruk tang og et disseksjonsmikroskop for å fjerne reproduksjonskanalen til en mannlig flue.
Fjern tilbehørskjertelparet fra alle de andre vevene, inkludert testiklene og ejakulasjonspæren, og overfør tilbehørskjertlene til en glassplate som inneholder serum supplert medium ved romtemperatur. Når 20 par tilbehørskjerker er samlet inn, vask kjertlene i en tallerken med PBS i ett til to minutter ved romtemperatur. På slutten av vasken, overfør kjertlene til nytilberedt dissosiasjonsløsning, og bruk skarpe tang under et dissekeringsmikroskop for å klemme midten av en kjertel.
Bruk et annet par tang, kutt vevet med den skarpe spissen for å skille den proksimale regionen av tilbehørskjertelen og ejakatorkanalen fra den delen av kjertelen som inneholder sekundære celler. Bruk deretter en pre-våt flamme avrundet bred 200 mikroliter pipettespiss for å overføre kjertlene til et 1,5 milliliterrør.
