Drosophila melanogaster Ovar-Dissektion: Eine Technik zur Ex-Vivo-Gewebevorbereitung

- Um Eierstöcke von lebenden Drosophila-Fliegen zu isolieren, beginnen Sie mit der Bewegung eines anästhesierten Weibchens in eine von drei Dissektionsbrunnen, die mit vorgewärmten Insektensektionsmedium gefüllt sind.

Unter einem Seziermikroskop trennen Sie den Bauch vom Thorax. Dann bewegen Sie den Bauch in einen neuen Brunnen. Um die Eierstöcke zu isolieren, halten Sie den Bauch am hinteren Ende und kratzen Sie die Fortpflanzungsorgane vorsichtig heraus. Schließlich übertragen Sie die Eierstöcke in einen frischen Brunnen. Nach diesem Schritt können Sie entweder den ganzen Eierstock verwenden oder ihn weiter in seine Komponentenstrukturen zerlegen.

Jeder Drosophila-Ovarial besteht aus mehreren Ovariolen, die aus einer Kette von Eikammern mit zunehmender Reife bestehen. Um die Ovariolen zu befreien, fixieren Sie den Eierstock am undurchsichtigen hinteren Ende und necken Sie vorsichtig die Schutzhülle aus der Umgebung des Eierstocks, bis die Ovariolen richtig getrennt sind.

Im Beispielprotokoll zeigen wir die Dissektion der Drosophila-Ovarien für ihre Verwendung in der lebenden und festen Gewebemikroskopie.

- Nach dem Aussortieren von fünf anästhesierten weiblichen Fliegen nach dem Textprotokoll, unter dem Seziermikroskop, verwenden Sie zwei Paar Zangen, um den Thorax vom Bauch zu trennen. Dann übertragen Sie vorsichtig den Bauch auf den zweiten Brunnen der Schale. Verwenden Sie ein Paar Zangen, um den Bauch am hinteren Ende zu halten, verwenden Sie das andere Paar Zangen, um langsam die Eierstöcke herauszudrücken.

Dann verwenden Sie die Zange, um einen einzelnen Eierstock durch das undurchsichtige hintere Ende zu halten und vorsichtig bewegen Sie es auf den dritten Brunnen der Schale für Necken oder Fixieren. Vorsichtig necken Sie die Schutzhülle aus der Umgebung der Eierstöcke, indem Sie ein Paar Zangen verwenden, um das hintere Ende zu halten und leicht eine neckische Nadel vom hinteren zum vorderen Ende zu fegen.