ניתוח טובולה מאליפיאני מזבוב למבוגרים: בידוד אוסמורגולטוריה ואיבר הפרשה

- התחל עם זבוב מבוגר מורדם בצלחת ניתוח. מאז זבובים בוגרים יש שני זוגות של tubules malpighian או MTs להתכנס על המעיים דרך שופכנים נפוצים, למשוך את הבטן האחורית מתוך הזבוב כדי לשחרר את MTs. זוג האחורי של MTs ישוחררו הראשון כפי שהם להקיף מאחורי המעיים.

כדי להרכיב את הצינוריות, החלק מוט זכוכית מתחת לשופכה והעבר את ה- MTs למגלשה מצופה פולי-ל-ליצין. הוסף את האיברים המנותחים על ידי לחיצה על השופכן כלפי מטה ולאחר מכן בזהירות לטאטא את המוט מעל MTs. פולי-L-ליצין על המגלשה יקדם התקשרות על ידי הגדלת מספר האתרים טעונים חיובית זמין עבור התאים טעונים שלילית של tubules לאגד. בפרוטוקול הבא, אנו לנתח MTs מן זבוב נקבה בוגרת ולהרכיב אותם עבור הדמיה חיה ex vivo במערכת זלוף.

- כדי להתחיל בהליך זה, מקם שתי קבוצות של הלחמה עוזר הידיים מהדק על שלב מיקרוסקופ הדמיה עם מהדק אחד בכל צד.

מורחים שומן ואקום על סרט התקרה ולחץ על דבק זלוף היטב מחלק על הקלטת כדי לצפות את החלק התחתון עם גריז. לאחר מכן, להסיר את זלוף היטב מחלק להשאיר בארות דגימה בודדים נעוצים בשומן הידרופובי. לאחר מכן, מקום 200 מיקרוליטרים של טמפרטורת החדר iPBS או חרק פוספט אגירה מלוחים בשמן מוקף היטב על שקופית פולי-L-ליצין מצופה. ולהעביר נקבה מורדמת אחת לעוף אליו.

החזק את הזבוב ליד בית החזה עם סט המלקחיים והשתמש בשני כדי לאחוז בעדינות בבטן האחורית.

ואז לצבוט את MTs הפנים בשופכה עם מלקחיים בסדר פעם הסט השני של MTs הוא חופשי מהבטן.

הנמך את השופכה היישר אל השקופית. השתמש בקצה הדק של מוט הזכוכית כדי לטאטא בעדינות כל צינורית על פני השטח של השקופית.

- ההצלחה של טכניקה זו תלויה לחלוטין בזיהוי מדויק וטיפול זהיר של צינוריות malpighian לפני. צינוריות פגומות יניבו תוצאות לא עקביות.

- לאחר מכן, מניחים את זלוף דבק היטב מחלק בחזרה על השקופית כדי ליצור נוזל קטן מלא היטב על tubule רכוב. לאחר מכן, למקם את הדגימה על הבמה מיקרוסקופ.