एक वयस्क मक्खी से मालपिगियन ट्यूबल विच्छेदन: एक ओस्मोरेगुलेटरी और मलाशय अंग को अलग करना

- एक विच्छेदन पकवान में एक एनेस्थेटाइज्ड वयस्क फ्लाई के साथ शुरू करें। संप के साथ छाती से फ्लाई को पकड़ें और संदंश की एक दूसरी जोड़ी का उपयोग करके पेट के पीछे के छोर को खोलें। चूंकि वयस्क मक्खियों में दो जोड़े मालपिगियन ट्यूबल या एमटीएस होते हैं जो आम मूत्रवर्धक के माध्यम से पेट पर एकाग्र होते हैं, इसलिए एमटीएस को छोड़ने के लिए फ्लाई से बाहर हिंद पेट को टग करते हैं । एमटीएस के पीछे की जोड़ी को पहले मुक्त किया जाएगा क्योंकि वे पेट के पीछे घेरते हैं । पूर्वकाल MTs मुक्त करने के लिए आंत tugging जारी है और फिर उंहें उड़ान से अलग करने के लिए मूत्राशय पर बंद चुटकी ।

ट्यूबल को माउंट करने के लिए, यूरेटर के नीचे एक ग्लास रॉड स्लाइड करें और एमटीएस को पॉली-एल-लिसिन-लेपित स्लाइड में स्थानांतरित करें। विच्छेदन अंगों को नीचे दबाकर और फिर ध्यान से MTs के ऊपर रॉड झाडू । स्लाइड पर पॉली-एल-lysine ट्यूबलों की नकारात्मक आवेशित कोशिकाओं के लिए उपलब्ध सकारात्मक आवेशित साइटों की संख्या में वृद्धि करके लगाव को बढ़ावा देगा । निम्नलिखित प्रोटोकॉल में, हम एक वयस्क महिला मक्खी से एमटीएस विच्छेदन करेंगे और उन्हें एक छिद्र प्रणाली में एक्स वीवो लाइव इमेजिंग के लिए माउंट करेंगे ।

- इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, हर तरफ एक क्लैंप के साथ इमेजिंग माइक्रोस्कोप स्टेज पर टांका लगाने में मदद करने वाले हाथों के दो सेट रखें। इसके बाद, इनफ्लो लाइन में संबंधित तुला ग्लास केशिकाएं डालें और वैक्यूम से जुड़ी आउटफ्लो लाइन। फिर उन्हें मदद करने वाले हाथों में माउंट करें। फिर उन्हें माइक्रोस्कोप के इमेजिंग स्टेज से संरेखित करें।

छत टेप पर वैक्यूम तेल फैलाएं और चिपकने वाले पर्फ्यूजन को अच्छी तरह से डिवाइडर को टेप पर दबाएं ताकि तेल के साथ नीचे कोट किया जा सके। चिपकने वाले पर्फ्यूजन को अच्छी तरह से डिवाइडर से छीलें और इसे तेल की ओर नीचे पॉली-एल-लिसिन-लेपित स्लाइड के शीर्ष पर रखें। इसके बाद, हाइड्रोफोबिक तेल में पता लगाए गए व्यक्तिगत नमूना कुओं को छोड़ने के लिए परफ्यूजन वेल डिवाइडर को हटा दें। इसके बाद, कमरे के तापमान के 200 माइक्रोलीटर आईपीबीएस या कीट फॉस्फेट बफर खारा को पॉली-एल-लिसिन-लेपित स्लाइड पर अच्छी तरह से घेर लिया। इसके बाद स्लाइड को स्टरोस्कोप के नीचे रखें, आइस कोल्ड श्नाइडर के माध्यम को विच्छेदन में डालें। और एक एकल एनेस्थेटाइज्ड मादा फ्लाई को स्थानांतरित करें।

छाती से उड़ना को संदंश के सेट से पकड़ें और पीछे के पेट को धीरे से पकड़ने के लिए दूसरे का उपयोग करें। छोटी, जानबूझकर गति में फ्लाई के पीछे के छोर को खोलें। एक बार हिंद आंत दिखाई देने के बाद, डिस्टल एंड पकड़ें और बीटपीटी, कच्छा टग के माध्यम से हिंद आंत को शरीर से दूर खींचकर अंतर्निहित श्वास नली से आंत और एमटीएस को मुक्त करें ।

इसके बाद एक बार मीटर का दूसरा सेट पेट से फ्री होने के बाद यूरेटर पर इंटीरियर एमटीएस को बारीक संदंश के साथ चुटकी लें । खींचे गए कांच की रॉड के साथ फ्री पूर्वकाल मीटर को यूरेटर के नीचे फिसलने से इस तरह उठाएं कि ट्यूबल दोनों तरफ गिर जाएं । इसके बाद, एमटीएस को सीधे समाधान से ऊपर उठाएं । इसके बाद, कांच की छड़ को इस तरह से बंद करें कि एमटीएस और यूरेटर का पालन किया जाए ।

यूरेटर को सीधे स्लाइड पर नीचे उतारें। इसके बाद मीटर के डिस्टल लेंस के ऑर्डर और सील को आगे ग्लास स्लाइड पर यूरेटर दबाकर चिपका दें। इसके बाद कांच की रॉड के बारीक सिर का इस्तेमाल करें ताकि प्रत्येक ट्यूबल को स्लाइड की सतह के पार धीरे-धीरे झाडू लगाई जा सके। ट्यूबल को कुचलने से बचने के लिए स्लाइड के खिलाफ रॉड को संभालें और ट्यूबल के ऊपर रॉड को स्लाइड करें, डिस्टल से परदे पर जाकर प्रत्येक ट्यूबल की पूरी लंबाई को पॉली-एल-lys-ine-coated की सतह पर संलग्न करें ।

- इस तकनीक की सफलता पूरी तरह से सटीक पहचान और पूर्वकाल मालपिगियन ट्यूबल्स की सावधानीपूर्वक हैंडलिंग पर निर्भर करती है। क्षतिग्रस्त ट्यूबल असंगत परिणाम पैदा करेंगे।

- इसके बाद, चिपकने वाले पर्फ्यूजन को स्लाइड पर वापस रखें ताकि माउंटेड ट्यूबल पर एक छोटा सा तरल पदार्थ भरा हुआ हो। उसके बाद, नमूना को माइक्रोस्कोप चरण पर रखें। क्रमशः इन्फ्लेशन और आउटलेट खोलने पर केशिकाओं को रखें।