Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.

 
Click here for the English version

Eilandtest: een methode met hoge doorvoer om drosophila-locomotorisch gedrag te evalueren

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- De eilandtest bestaat uit een verhoogd wit platform in een bak met zeepwater, bedekt met een transparante doos met één open zijde. Een camera bovenop de doos registreert bovengrondse beelden van het platform en er worden lichten geplaatst om een gelijkmatige verlichting van het gebied te garanderen.

Om de vliegen op de arena te laden, tikt u op een flacon tegen een plat oppervlak om alle vliegen naar de bodem te brengen. Verwijder snel achter elkaar de flaconplug, draai de flacon om en tik op het open uiteinde van de flacon op het platform om alle vliegen tegelijkertijd uit te schakelen. Landen op het platform activeert een ontsnappingsreactie. Vliegen met typische mobiliteit kunnen het platform in een paar seconden wissen, in tegenstelling tot die met motorische defecten.

Proefpersonen zijn beperkt tot de doos en degenen die op het zeepwater landen, duiken snel onder omdat zeep de oppervlaktespanning van water vermindert. Om het motorische gedrag van verschillende omstandigheden te beoordelen, tel je de resterende vliegen op het platform na een bepaalde periode.

In dit voorbeeldprotocol zien we een opstelling van de eilandtest die compatibel is met semi-geautomatiseerde beeldanalyse.

- Bereid eerst minimaal drie flacons per experimentele aandoening voor als biologische replica's. Elke flacon moet ongeveer 15 vliegen van hetzelfde geslacht en dezelfde leeftijd bevatten. Belangrijk is dat de vliegen intacte vleugels moeten hebben.

Maak de mappen om de experimenten op te slaan. Genereer deze in een mapstructuur die is gedefinieerd door de voorwaarden en repliceert. Als het experiment bijvoorbeeld twee genotypen heeft met elk vijf replica's, maak dan een hoofdmap met de datum van het experiment en maak in die map één submap voor elk genotype. Maak vervolgens in de genotypemappen submappen voor elke replica.

Stel vervolgens het testapparaat in. Voeg koud water met een kleine hoeveelheid zeep toe aan de badbak en plaats het platform in het midden van het bad, als het nog niet in het bad is bevestigd. Bedek het dienblad en platform met een transparante doos.

Om het platform te verlichten, plaatst u er een koele lamp, zoals gewone 12-volt LED's, boven. Plaats ook een webcam die is aangesloten op een computer direct boven het platform.

Open op de computer de beeldopnamesoftware. Selecteer in het menusysteem de juiste webcam als opnameapparaat. Plaats een dode vlieg op het eiland om de video-instellingen aan te passen. Pas de helderheid, het contrast en de kleur in de software aan, zodat de dode vlieg zwart lijkt tegen een witte achtergrond.

Pas vervolgens de timelapse-filminstellingen aan om de films op te slaan als AVI-bestanden. Blader vervolgens naar de map waar de gegevens moeten worden opgeslagen en definieer de naam van de film. Sla deze wijzigingen op.

Voor compressie van de beeldgegevens kiest u de Intel IYUV-code. Stel de opnamesnelheid elke 0,1 seconden in op één frame en pas de bijbehorende afspeelsnelheid aan op 10 beelden per seconde.

Ga ten slotte naar de instelling Geavanceerd en selecteer Een BNP-afbeelding maken voor elk vastgelegd frame. Blader vervolgens naar dezelfde map die u hebt gekozen om de AVI-bestanden te hosten en druk op OK.

Voordat u begint, moet u ervoor zorgen dat het eiland leeg en schoon is. Start vervolgens de opname in de timelapse-beeldinterface van de beeldopnamesoftware.

Neem een flacon met vliegen en tik er twee of drie keer op om alle vliegen naar de bodem te slaan. Verwijder vervolgens snel de stekker uit de flacon en tik krachtig op de vliegen op het platform. Ze moeten allemaal op ongeveer hetzelfde moment het platform raken.

Geef de vliegen tot 30 seconden om het platform te verlaten. Stop vervolgens de opname. Verwijder indien nodig handmatig de resterende vliegen van het platform.

Voordat u doorgaat met het volgende experiment, moet u ervoor zorgen dat u de map opnieuw definieert waar de volgende set gegevens moet worden opgeslagen.

Tags

Lege waarde probleem
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter