Ensaio da Ilha: Um Método de Alto Rendimento para Avaliar o Comportamento Locomotor de Drosophila

- O ensaio da ilha consiste em uma plataforma branca elevada em uma bandeja de água com sabão, coberta por uma caixa transparente com um lado aberto. Uma câmera em cima da caixa registra imagens aéreas da plataforma, e luzes são colocadas para garantir a iluminação da área.

Para carregar as moscas na arena, toque um frasco contra uma superfície plana para trazer todas as moscas para o fundo. Em rápida sucessão, remova o plugue do frasco, vire o frasco e toque na extremidade aberta do frasco na plataforma para derrubar todas as moscas ao mesmo tempo.

Os sujeitos estão confinados à caixa, e aqueles que pousam na água com sabão rapidamente submergem porque o sabão diminui a tensão superficial da água. Para avaliar o comportamento locomotor de diferentes condições, conte as moscas restantes na plataforma após um período de tempo definido.

Neste protocolo de exemplo, veremos uma configuração do ensaio da ilha compatível com análise de imagem semi-automatizada.

- Primeiro, prepare um mínimo de três frascos por condição experimental como replicação biológica. Cada frasco deve conter aproximadamente 15 moscas do mesmo sexo e idade semelhante. É importante que as moscas tenham asas intactas.

Crie as pastas para armazenar os experimentos. Gere-as em uma estrutura de diretório definida pelas condições e réplicas. Se, por exemplo, o experimento tiver dois genótipos com cinco réplicas cada, criar uma pasta principal com a data do experimento e, dentro dessa pasta, criar uma subpasta para cada genótipo.

Em seguida, configure o aparelho de teste. Adicione água fria com uma pequena quantidade de sabão na bandeja de banho e posicione a plataforma no meio do banho, se ainda não estiver fixada no banho. Cubra a bandeja e a plataforma com uma caixa transparente.

Para iluminar a plataforma, posicione uma lâmpada fria, como LEDs comuns de 12 volts, acima dela.

No computador, abra o software de gravação de imagens. Do sistema Menu, selecione a webcam apropriada como o dispositivo de captura. Coloque uma mosca morta na ilha para ajustar as configurações de vídeo. Ajuste o brilho, contraste e cor no software para que a mosca morta pareça preta contra um fundo branco.

Em seguida, ajuste a configuração do filme de lapso de tempo para salvar os filmes como arquivos AVI. Em seguida, navegue até o diretório onde os dados devem ser salvos e defina o nome do filme. Salve essas alterações.

Para compactação dos dados da imagem, escolha o código Intel IYUV. Defina a velocidade de gravação para um quadro a cada 0,1 segundos e ajuste a taxa de reprodução correspondente para 10 imagens por segundo.

Por fim, vá para a configuração Avançado e selecione Criar uma imagem BNP para cada quadro capturado. Em seguida, navegue até o mesmo diretório que você escolheu para hospedar os arquivos AVI e pressione OK.

Antes de começar, certifique-se de que a ilha está vazia e limpa. Em seguida, inicie a gravação na interface de imagem de lapso de tempo do software de gravação de imagens.

Pegue um frasco contendo moscas e toque-o duas ou três vezes para derrubar todas as moscas até o fundo. Em seguida, remova rapidamente o plugue do frasco e toque vigorosamente as moscas na plataforma.

Dê às moscas até 30 segundos para sair da plataforma. Em seguida, pare a gravação.

Antes de prosseguir para o próximo experimento, certifique-se de redefinir o diretório onde o próximo conjunto de dados deve ser armazenado.