Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content.

 
Click here for the English version

Ada Testi: Drosophila Locomotor Davranışını Değerlendirmek için Yüksek Verimli Bir Yöntem

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- Ada tahlilleri, bir açık tarafı açık şeffaf bir kutu ile kaplanmış sabunlu bir su tepsisinde yükseltilmiş beyaz bir platformdan oluşur. Kutunun üstündeki bir kamera platformun tepegöz görüntülerini kaydeder ve alanın eşit şekilde aydınlatılmasını sağlamak için ışıklar yerleştirilir.

Sinekleri arenaya yüklemek için, tüm sinekleri dibe getirmek için düz bir yüzeye bir şişeye dokunun. Hızlı bir şekilde art arda, şişe fişini çıkarın, şişeyi ters çevirin ve aynı anda tüm sinekleri devirmek için şişenin açık ucuna platforma dokunun. Platforma inmek bir kaçış tepkisini tetikler. Tipik hareketliliğe sahip sinekler, lokomotor kusurları olanların aksine platformu birkaç saniye içinde temizleyebilir.

Denekler kutuya hapsedilir ve sabunlu suya inenler hızla batar, çünkü sabun suyun yüzey gerilimini azaltır. Farklı koşullardan lokomotor davranışını değerlendirmek için, belirli bir süre sonra platformdaki kalan sinekleri sayın.

Bu örnek protokolde, ada testinin yarı otomatik görüntü analizi ile uyumlu bir kurulumunu göreceğiz.

- İlk olarak, biyolojik çoğalırken deneysel durum başına en az üç şişe hazırlayın. Her şişe aynı cinsiyet ve benzeri yaşta yaklaşık 15 sinek içermelidir.

Denemeleri depolamak için klasörleri oluşturun. Bunları koşullar ve çoğaltmalar tarafından tanımlanan bir dizin yapısında oluşturun. Örneğin, denemenin her biri beş çoğaltma içeren iki genotip varsa, denemenin tarihiyle bir ana klasör oluşturun ve bu klasörün içinde her genotip için bir alt klasör oluşturun.

Ardından, test cihazını kurun. Banyo tepsisine az miktarda sabunla soğuk su ekleyin ve platformu banyoda sabit değilse, banyonun ortasına yerleştirin. Tepsiyi ve platformu şeffaf bir kutu ile örtün.

Platformu aydınlatmak için, sıradan 12 voltLUK LED'ler gibi serin bir lambayı üzerine yerleştirin. Ayrıca, bir bilgisayara bağlı bir web kamerasını platformun hemen üzerine yerleştirin.

Bilgisayarda, görüntü kayıt yazılımını açın. Menü sisteminden, yakalama cihazı olarak uygun web kamerasını seçin. Video ayarlarını ayarlamak için adaya ölü bir sinek yerleştirin. Yazılımdaki parlaklığı, kontrastı ve rengi, ölü sinek beyaz bir arka plana karşı siyah görünecek şekilde değiştirin.

Ardından, filmleri AVI dosyaları olarak kaydetmek için zaman atlamalı film kurulumunu ayarlayın.

Görüntü verilerinin sıkıştırı için Intel IYUV kodunu seçin. Kayıt hızını her 0,1 saniyede bir kareye ayarlayın ve karşılık gelen oynatma hızını saniyede 10 görüntüye ayarlayın.

Son olarak, Gelişmiş ayarına gidin ve Yakalanan her kare için BNP görüntüsü oluştur'u seçin.

Başlamadan önce, adanın boş ve temiz olduğundan emin olun.

Sinek içeren bir şişe alın ve tüm sinekleri dibe indirmek için iki veya üç kez dokunun. Ardından, fişi şişeden hızlıca çıkarın ve sinekleri platforma kuvvetlice dokunun. Hepsi kabaca aynı anda platforma çarpmalıdır.

Sineklere platformdan ayrılmaları için 30 saniyeye kadar süre verin. Ardından kaydı durdurun. Gerekirse, kalan sinekleri platformdan manuel olarak çıkarın.

Bir sonraki denemeye geçmeden önce, bir sonraki veri kümesinin depolanacak olduğu dizini yeniden tanımlayın.

Tags

Boş Değer Sorun
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter