Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Begin met het cohousing van een vast aantal mannelijke en vrouwelijke Drosophila melanogaster fruitvliegen in een flacon met maïsmeel medium. Dit zorgt voor een consistente dichtheid van nakomelingen.
Laat de vrouwelijke vliegen eieren leggen. Verwijder vervolgens de volwassen vliegen. De eieren worden larven, poppen en uiteindelijk volwassen vliegen in een periode van 10 dagen. Nieuwe vliegen die eerder opkomen dan hun cohort moeten vóór dag 9 worden verwijderd. Verdeel de nu gesynchroniseerde vliegen in groepen voor de controle- en experimentele omstandigheden. Cohousing van mannelijke en vrouwelijke vliegen maakt paring mogelijk, waardoor een variabele wordt verwijderd die de levensduur beïnvloedt.
Na enkele dagen, scheid de vliegen per geslacht in groepen. Plaats een gelijk aantal vliegen in de overeenkomstige experimentele toestand. Breng om de drie dagen de levende vliegen over in een nieuwe flacon en noteer het aantal dode vliegen. Herhaal dit proces totdat alle vliegen zijn gestorven.
Na ten minste drie replicerende experimenten, plot het gemiddelde percentage overlevende vliegen per dag om gemiddelde overlevingscurven voor elke aandoening te genereren. In dit voorbeeld zullen we zien hoe we overlevingscurven kunnen genereren voor cohorten die worden behandeld met hormoonontregelende chemicaliën.
- Zet in het levensduurprotocol eerst 20 flacons op met acht vrouwtjes en vier mannetjes, elk gevuld met 10 milliliter maïsmeelvoer, en huisvest ze op 25 graden Celsius. Gooi na vier dagen de vliegen weg en plaats de flesjes terug in de broedmachine. Verwijder in de late namiddag van dag 9 alle nieuw ontstane vliegen uit de flacons en breng de flacons terug naar de incubator.
Na 16 tot 24 uur, verdeel bij 250 eendags volwassen vliegen van beide geslachten in vier groepen onder lichte kooldioxide verdoofd en breng ze over naar 250 milliliter flessen met volwassen medium voedsel, drie aangevuld met verschillende EDC concentraties, en een met de EE2 oplosmiddel alleen. Houd de vliegen op 25 graden Celsius gedurende twee tot drie dagen om ze te laten paren. Sorteer vervolgens elk cohort vliegen op geslacht in twee groepen. waarbij het aantal dode vliegen wordt afgetrokken van het aantal overlevende vliegen van de vorige overdracht, zodat het aantal overlevenden bij elke overdracht automatisch wordt verkregen.
Breng de vliegen na drie dagen zonder verdoving over naar nieuwe flesjes met het bijbehorende voedsel op hetzelfde moment en controleer op de dood. Noteer de leeftijd van de vliegen en het aantal dode vliegen. Herhaal de overdracht om de drie dagen totdat alle vliegen sterven.
