Montering Voksen Drosophila Brains: En metode til at forberede slides til Confocal Imaging

- På en positivt ladet mikroskop dias, overholde to dække glider med tilstrækkelig afstand mellem dem til at skabe et rum for Drosophila hjerner, der skal monteres. Under stereo mikroskop, pipette hjerner i montering medium i dette rum. Den negative ladning af vævet vil hjælpe hjerner overholde den positive ladning på overfladen af diaset.

Fjern overskydende monteringsmedium for at give mulighed for præcis placering af hjernen på diaset i et gittermønster med antenneflipperne vendt op, og bro over de to dæksedler ved at klæbe et tredje dæksel glide over for at dække hjernen.

For at udfylde hulrummet skal du placere monteringsmediet en dråbe ad gangen i kanten af hulrummet og lade det sprede sig ved kapillær bevægelse, så det ikke forstyrrer hjernen.

Forsegl hulrummet med neglelak, og opbevar ved negative 20 grader Celsius i mørke for at bevare fluorescensen af farvede væv.

I eksempelprotokollen monterer vi Drosophila hjerner til konfokal billeddannelse af immunostained neuroner.

- At montere hjerner, bygge en bro dias. Position to base dækker glider omkring en centimeter fra hinanden på en positivt ladet dias. Sørg for, at positivt ladede side er med billedsiden op. Derefter holde dækslet glider til diaset med fingernegl polish, og lad den polske tørre helt før du fortsætter.

Placer derefter rutsjebanen under et stereomikroskop og pipettehjerner i medium ind i rummet mellem dækslet glider. Sørg for at justere belysningen for at forbedre visualiseringen af hjernen.

Dernæst indsugning af ekstra monteringsmedier fra diaset, idet du er omhyggelig med at undgå hjernen. Derefter væger du væk resterende overskydende monteringsmedier. Dette vil gøre det muligt for hjernen at blive placeret mere præcist. Nu ved hjælp af pincet, orientere hjernen til et gittermønster med deres antenneflipper vendt op.

Placer derefter et dæksel over hjernen, og brug fingerneglpolering til at forsegle kanterne af topdækslet, der er fastgjort til bunddækslet.

Nu indlæses midterhulen med frisk montering medier drop-wise, så medierne, der skal tegnes under dækslet slip ved kapillær handling. Når hulrummet er fyldt, forsegle den helt ved hjælp af klar fingernegl polish.