成人 ショウジョウバエ 脳の取り付け:共焦点イメージング用のスライドを準備する方法

- 正に荷電した顕微鏡スライドで、ショウジョウバエの脳が取り付けられるスペースを作るのに十分な距離を持つ2つのカバースリップを付着させる。ステレオ顕微鏡の下で、その空間に取り付ける媒体の脳をピペット化する。組織の負の電荷は、脳がスライドの表面の正の電荷に付着するのを助ける。

余分な取り付け媒体を取り除き、アンテナローブを上に向けたグリッドパターンでスライド上の脳の正確な位置を可能にし、3番目のカバースリップを付着させて脳を覆うことによって2つのカバースリップをブリッジします。

空洞を埋めるために、取り付け媒体を一滴ずつ空洞の端に配置し、脳を乱さないように毛細血管運動によって広がるようにします。

マニキュアで空洞を密封し、暗い20°Cで保存して、染色された組織の蛍光を維持します。

このプロトコル例では、免疫染色されたニューロンの共焦点イメージングのためのショウジョウバエ脳をマウントします。

- 脳を取り付けるにはブリッジスライドを作り、2つのベースカバーを正に帯電したスライドで約1センチメートル離れて滑ります。正に帯電した側が上向きであることを確認してください。

次に、スライドをステレオ顕微鏡下に置き、ミディアムでピペットの脳をカバースリップの間のスペースに入れなさい。

次に、余分な取り付けメディアをスライドから吸引し、脳を避けるように注意してください。その後、残りの過剰な取り付けメディアを離れて、これは脳をより正確に配置することができます。今、鉗子を使用して、彼らのアンテナローブを上に向けてグリッドパターンに脳を向けます。

次に、脳の上にカバースリップを置き、指の爪の磨きを使用して、ベースカバースリップに取り付けられている上部カバースリップの端を密封します。

今、中央の空洞を新鮮な取り付け媒体をドロップワイズでロードし、毛細管作用によってカバースリップの下にメディアを引き出せるようにします。