Encyclopedia of Experiments: Biology
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- En una diapositiva de microscopio cargada positivamente, adhieren dos resbalones de cubierta con suficiente distancia entre ellos para crear un espacio para que los cerebros de Drosophila se monten. Bajo el microscopio estéreo, pipetear los cerebros en el medio de montaje en ese espacio.
Retire el exceso de medio de montaje para permitir un posicionamiento preciso de los cerebros en la diapositiva en un patrón de rejilla con los lóbulos antennales mirando hacia arriba, luego puentee los dos resbalones de la cubierta adhiriendo un tercer resbalón de la cubierta a través para cubrir los cerebros.
Para rellenar la cavidad, coloque el medio de montaje una gota a la vez en el borde de la cavidad, y deje que se propague por movimiento capilar para que no moleste los cerebros.
Sellar la cavidad con esmalte de uñas, y almacenar en negativo 20 grados Celsius en la oscuridad para preservar la fluorescencia de los tejidos manchados.
En el protocolo de ejemplo, montaremos cerebros de Drosophila para imágenes confocales de neuronas inmunodeprimidos.
- Para montar los cerebros, construir un tobogán de puente. Coloque dos cubiertas de base se desliza aproximadamente un centímetro de distancia en un tobogán cargado positivamente. Asegúrese de que el lado cargado positivamente está boca arriba.
A continuación, coloque la diapositiva debajo de un microscopio estéreo y cerebros de pipeta en medio en el espacio entre los resbalones de la cubierta. Asegúrese de ajustar la iluminación para mejorar la visualización de los cerebros.
A continuación, aspirar el medio de montaje adicional desde el tobogán, teniendo cuidado de evitar los cerebros. Entonces, mecha el exceso de medios de montaje restantes. Esto permitirá que los cerebros se coloquen con mayor precisión.
A continuación, coloque un resbalón de la cubierta sobre el cerebro, y utilice el esmalte de la uña para sellar los bordes del resbalón de la cubierta superior que están unidos a los resbalones de la cubierta de la base.
Ahora, cargue la cavidad central con medios de montaje frescos en cuanto a caída, permitiendo que los medios se dibujen debajo del resbalón de la cubierta por acción capilar.
