Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Pozitif yüklü bir mikroskop kaydırağı üzerinde, Drosophila beyinlerinin monte edilmesi için bir alan oluşturmak için aralarında yeterli mesafe olan iki kapak kaydırağı takın. Stereo mikroskop altında, beyni o alana montaj ortamında pipetleyin. Dokunun negatif yükü, beyinlerin slayt yüzeyindeki pozitif yüke yapışmasına yardımcı olacaktır.
Anten lobları yukarı bakacak şekilde bir ızgara deseninde beynin slayt üzerinde hassas bir şekilde konumlandırılmasına izin vermek için fazla montaj ortamını çıkarın, ardından beyinleri örtmek için üçüncü bir kapak kayması yaparak iki kapak kayması arasında köprü kurun.
Boşluğu doldurmak için, montaj ortamını her seferinde bir damla boşluğun kenarına yerleştirin ve beyinleri rahatsız etmeyecek şekilde kılcal hareketle yayılmasına izin verin.
Boşluğu oje ile kapatın ve lekeli dokuların floresanını korumak için karanlıkta eksi 20 santigrat derecede saklayın.
Örnek protokolde, immünostained nöronların konfokal görüntülemesi için Drosophila beyinlerini monte edeceğiz.
- Beyinleri monte etmek için bir köprü kaydırağı oluşturun. İki taban kapağını pozitif yüklü bir slaytta kabaca bir santimetre aralıklarla yerleştirin. Pozitif yüklü tarafın yukarı bakacak şekilde olduğundan emin olun. Ardından kapak kaymalarını tırnak cilası ile kaydırağa takın ve devam etmeden önce cilanın tamamen kurumasını bekleyin.
Daha sonra, slaytı stereo mikroskop ve pipet beyinleri orta bir şekilde kapak kaymaları arasındaki boşluğa yerleştirin.
Daha sonra, slayttan ekstra montaj medyasını epire edin, beyinlerden kaçınmaya dikkat edin. Sonra, kalan fazla montaj medyasını ortadan kaldırın. Bu, beyinlerin daha hassas bir şekilde konumlandırılmasını sağlayacaktır. Şimdi, tokmakları kullanarak, beyinleri anten lobları yukarı bakacak şekilde bir ızgara desenine yönlendirin.
Ardından, beyinlerin üzerine bir kapak kayması yerleştirin ve üst kapak kaymasının taban kapak kaymalarına tutturulmuş kenarlarını kapatmak için tırnak cilası kullanın.
Şimdi, orta boşluğu taze montaj ortamı damlası açısından yükleyin, ortamın kapak kaymasının altına kılcal işlemle çizilmesini bekleyin. Boşluk dolduğunda, açık tırnak cilası kullanarak tamamen kapatın.
