ショウジョウバエ 神経筋接合(NMJ)の定量化:シナプス形態と機能を評価する方法

まず、MJや神経筋接合の異なる側面を強調するマーカーを持つ免疫染色体ショウジョウバエ幼虫。これは運動ニューロン軸索の結末が筋肉に接触する領域であり、その形態はシナプス機能の読み出しとして使用される。

軸索は、ブトンと呼ばれる膨らみを形成するいくつかの枝で終わる。神経伝達物質はブトンから放出され、筋肉収縮を引き起こす。神経伝達物質放出の領域は活性ゾーンと呼ばれ、ここでは1つのマーカーがNMJを概説するシナプスタンパク質に特異的であり、もう1つのマーカーは活性領域に存在するタンパク質に対するものである。

次に、顕微鏡を使用してNMJ画像を取得し、半自動画像解析ソフトウェアで形態を定量的に評価します。

次の例では、DLG1、ポストナプスマーカー 、およびアクティブなゾーンマーカーであるBRPで染色されたショウジョウバエNmJの形態を分析します。

- このプロトコルでは、NmJのイメージスタックを生成し、チャンネル1がDLG1染色または類似のマーカーを示し、チャンネル2がBRP染色を示す個々のTIFFファイルとして保存します。

次に、画像シリーズをTIFFとして保存するときに顕微鏡がイメージシリーズに割り当てた一意のファイル文字列を特定します。

各イメージファイルに対して、デフォルト名スタックとフラットスタックで2つの新しいファイルが作成され、その後に元のイメージ名が付けられます。

最初のプロジェクションが開いたら、フリーハンド選択ツールを選択し、マウスを使用して目的の完全なNMJ端末を含む領域を定義します。

NMJ の機能を定量化するには、まず、ショウジョウバエNMJモーモメトリクスインターフェイスに移動し、スケールを設定します。例えば、画像の1ピクセルが0.72ミクロンに対応する場合は、スケールピクセルを1に設定し、距離を0.072にスケールします。

分析後、分析された各シナプスの新しい画像ファイルが親フォルダに保存され、定量的測定値が結果.txtファイルに格納されます。

たとえば、シナプス端子の一部が黄色のアウトラインに含まれていない可能性があります。背景の一部はシナプス端子に含まれる可能性があります。