嗜血性护士细胞的微注射：细胞内分娩方法

- 将带解剖蛋室的盖片放在显微镜阶段。找到适当发育阶段的蛋室，为微注射定位。中后期卵室有一个大的可见卵母蛋黄，方向正确的蛋黄与它们前后轴垂直于注射方向。

嗜血神经细胞是蛋室内由15个细胞组成的一组，负责将母体衍生的营养物质和生物分子沉积到发育中的卵母细胞中。建立微注射系统，以适当的注射和补偿压力，以确保一致的注射量和向外流动。 小心地将先前加载的毛细管针带入视野，使细胞和针头处于同一焦点平面。

确保毛细纸尖没有空气被困，溶液有连续流动，然后调整目标的Z位置，聚焦于将毛囊细胞与护士细胞分离的膜，将针头插入护士细胞并进行注射。

以下协议演示了用荧光寡核苷酸探针（称为分子信标）对母体贡献的活细胞成像的 mRNA成绩单进行微注射的Drosophila 护士细胞。

- 对于分子信标微注入，选择40倍油靶点，用解剖的蛋室在显微镜阶段安装盖滑，在中后期发育阶段定位一个适合微注入的卵室，然后设置具有适当注射和补偿压力的微注射器。

使用微操纵器操纵杆，轻轻地将装有一微升分子信标溶液的针头放入油滴中。将尖端聚焦到视场的外围。执行清洁功能，从针尖上取出空气，确保针头有流动，并将针头带到家中位置。

聚焦于要微注入的卵室，将针头重新聚焦在蛋室边缘附近。 对目标的 Z 位置进行精细调整，使将毛囊细胞与护士细胞分离的膜成为焦点。 将针头插入护士细胞，在两到五秒内注射分子信标。

-为确保可重复的微注射成功，请仔细关注将毛囊细胞和将要注射的护士细胞分离的膜，同时将针尖与微操纵器对焦。

- 当所有分子信标都注射完后，轻轻取出针头，将其缩回主位置。将目标更改为图像采集所需的放大倍数，然后聚焦于新目标下的蛋室，开始图像采集。