Drosophila 간호사 세포의 미세 주입: 세포 내 전달의 방법

- 해부된 계란 챔버가 있는 커버슬립을 현미경 단계에 배치합니다.

드로소필라 신경세포는 모계 유래 영양소와 생체분자를 개발 난소세포에 증착하는 계란 챔버 내부의 15개의 세포군입니다.

모세관의 끝에 갇힌 공기가 없고 용액의 연속흐름이 있는지 확인하십시오.

다음 프로토콜은 살아있는 세포 화상 진찰을 위한 모계 기여한 mRNA 성적증명서에 대하여 분자 비콘에게 불린 형광 올리고뉴클레오티드 프로브를 가진 Drosophila 간호세포 세포를 마이크로 주입하는 것을 보여줍니다.

- 분자 비콘 미세 주입의 경우, 40x 오일 목표를 선택하고 해부 된 계란 챔버가있는 커버 슬립을 현미경 단계에 장착합니다.

마이크로 조작기 조이스틱을 사용하여 분자 비콘 용액 1 마이크로리터가 들어있는 바늘을 오일 드롭에 부드럽게 하소서. 팁을 시야 의 주변쪽으로 집중시하십시오.

계란 챔버에 초점을 맞추고, 계란 챔버의 가장자리 근처에 다시 초점으로 바늘을 가지고. 간호사 세포에서 여포 세포를 분리하는 멤브레인이 초점을 맞출 수 있도록 목표의 Z 위치의 미세 조정을 수행.

- 재현 가능한 미세 주입 성공을 보장하기 위해, 소감기와 초점에 바늘의 끝을 가져오는 동안, 주입 될 여포 세포와 간호사 세포를 분리 하는 막에 신중 하 게 집중.

- 모든 분자 비콘을 주입하면 바늘을 부드럽게 제거하고 홈 위치로 철회합니다.