Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Colocar un cubrecoche con cámaras de huevo diseccionadas en la etapa del microscopio. Localice una cámara de huevo de la etapa de desarrollo adecuada y orientación para la microinyección. Cámaras de huevo de etapa media a tardía tienen una yema de ócito visible grande, y las que están en la orientación correcta son con su eje anterior-posterior perpendicular a la dirección de inyección.
Las células nerviosas de Drosophila son un grupo de 15 células dentro de la cámara de óvulos responsables de depositar nutrientes y biomoléculas de origen materno en el oocito en desarrollo.
Asegúrese de que no haya aire atrapado en la punta del capilar y de que haya un flujo continuo de la solución.
El siguiente protocolo demuestra microinyectos células enfermeras de Drosophila con sondas fluorescentes de oligonucleótido, llamadas balizas moleculares, contra transcripciones de ARNm aportadas maternalmente para imágenes de células vivas.
- Para la microinyección de baliza molecular, seleccione el objetivo de aceite de 40x y monte un resbalón de cubierta con la cámara de huevo diseccionada en la etapa del microscopio.
Usando el joystick micromanipulator, baje suavemente una aguja cargada con un microlitro de solución de baliza molecular en la gota de aceite. Ponga la punta en el foco hacia la periferia del campo de visión. Realice una función limpia para extraer el aire de la punta de la aguja y asegurarse de que haya flujo de la aguja, y lleve la aguja a la posición de casa.
Concéntrese en la cámara de huevos para ser microinyecida, y vuelva a enfocar la aguja cerca del borde de la cámara de huevos. Realice un ajuste fino de la posición Z del objetivo de manera que la membrana que separa las células folículos de las células enfermeras esté enfocada.
- Para asegurar el éxito reproducible de la microinjección, concéntrate cuidadosamente en la membrana que separa las células folículos y las células enfermeras que se inyectarán, mientras que poner la punta de la aguja en el foco con el micromanipulador.
- Cuando se hayan inyectado todas las balizas moleculares, retire suavemente la aguja y retírela a la posición de inicio.
