Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 首先,从脱水和干燥固定样品开始,以减少常规扫描电子显微镜(SEM)的运行压力降低时去除气体和液态水引起的样品失真。
要使样品脱水,请在水中用增加的乙醇浓度清洗,直到达到100%乙醇。然后用乙醇中的化学干燥剂重复此过程,直到样品用纯干燥剂清洗。 将样品和干燥剂转移到蒸发盘上。 用最少的额外干燥剂盖住它,让它在烟雾罩中干燥过夜。
接下来,使用碳胶带将准备好的样品安装在显微镜存根的顶部。最后,将银漆涂在存根的边缘,然后从存根边缘涂抹到每个样品上,以减少过多电子的积累,这可能导致不良图像文物。
在这个实验中,果蝇,果蝇,果蝇,准备使用干燥剂HMDS进行SEM分析。
- 为了准备德罗索菲拉梅拉诺加斯特,在4摄氏度下将麻醉苍蝇浸入1毫升的固定物中2小时,确保它们完全被淹没。
使用玻璃移液器去除固定物。在1.5毫升微中福格管中三次清洗固定的 Drosophila样品,在室温下用1 毫升 0.1摩尔磷酸盐缓冲 pH 7.2洗涤器,10 分钟。 使用玻璃移液器去除每次洗涤,小心不要移除样品。
然后将样品脱水到微富格管中,体积为1毫升,使用分级乙醇系列,每次10分钟。使用玻璃移液器去除每次洗涤,小心不要去除样品。 将样品保存在1.5毫升微中福格管中,只需足够的100%乙醇来覆盖它。
要使用 HMDS对苍蝇进行化学干燥,首先,用1到2 个 HMDS溶液和 100% 乙醇解决方案替换 100% 乙醇溶液 20 分钟。然后用 2 到 1 个 HMDS 溶液和 100%乙醇替换该解决方案 20 分钟。最后,用 100% HMDS 替换此解决方案 20分钟,然后重复此过程一次。
转移样本, 这是在一个1.5毫升的微中心管和HMDS,到一次性铝称重盘。 用足够新鲜的100% HMDS 替换 100% HMDS 以覆盖样品。 将样品直接放入铝盘中用松动的盖子(如盒子)干燥,防止碎屑落在样品上,并允许其干燥 12 至 24 小时。
安装德罗索菲拉标记铝安装存根的底部。使用精密的钳子将干苍蝇置于所需的位置在解剖显微镜下固定在存根顶部的碳粘合剂标签上。在存根的外缘涂抹导银胶粘剂。
使用牙签将银漆与苍蝇连接起来,确保导电性,确保油漆不会触及所需的成像区域。 将存根放在存根支架盒中,然后将打开的存根支架盒放在干燥器中,使银漆干燥至少三个小时。